七方胃痛颗粒对Hp感染胃上皮细胞TFF1表达的调控研究

三叶肽因子1（TFF1）在胃粘膜损伤修复和抑制肿瘤生长方面起着重要作用。七方胃痛颗粒对消化性溃疡显示了较好的治疗效果，但其对TFF1表达的影响和机制不清楚。本研究从体外活细胞实验（in vitro）着手，将幽门螺杆菌（Hp）按100:1感染人胃上皮细胞（AGS）后共同培养24h，施以七方胃痛颗粒药物血清和其他因素，采用荧光定量PCR方法检测TFF1mRNA的表达，用质粒载体TFF1报告基因瞬时转染细胞，报告基因分析七方胃痛颗粒对Hp感染AGS细胞TFF1基因转录的影响及NF-κB信号通路在其中的作用，质粒载体TFF1野生株和多个变异株报告基因瞬时转染AGS细胞进行报告基因、EMSA分析和验证Hp感染AGS细胞TFF1基因启动子区NF-κB蛋白结合位点和七方胃痛颗粒对其的干预作用，拟从基因转录和蛋白结合位点水平探索七方胃痛颗粒调控Hp感染AGS细胞TFF1的表达机制，阐明其作用靶点。

背景：由H.pylori感染引起的胃黏膜损伤是导致胃癌发生的基础, TFF1基因作为胃黏膜及上皮细胞的早期修复及抑癌因子, 在胃肠道黏膜损伤修复和完整性方面起着重要作用; 七方胃痛颗粒在促进黏膜上皮细胞修复再生，改善溃疡愈合的效果，促进表皮生长因子（EGF）及受体的表达方面显示了较好的效果, 但其对TFF1表达的影响和机制尚未明确。.方向：观察七方胃痛颗粒对Hp感染人胃黏膜上皮细胞TFF1mRNA和TFF1、ERK/NF-KB蛋白及TFF1基因启动子区NF-κB蛋白结合位点的影响，从基因转录和蛋白结合位点水平探索七方胃痛颗粒调控Hp感染AGS细胞TFF1的表达机制，为阐明该复方治疗作用的靶点提供理论依据。.内容：从体外活细胞实验（in vitro）着手，将Hp按100:1感染AGS细胞后共同培养24h，施以临床疗效确切的七方胃痛颗粒和其他因素，采用荧光定量PCR方法检测TFF1mRNA的表达；Western blot法检测TFF1、磷酸化ERK及NF-κB蛋白的表达；同时采用U0126抑制ERK信号通路后，观察TFF1蛋白表达的变化。质粒载体TFF1野生株和多个变异株瞬时转染AGS细胞，分析Hp感染AGS细胞后TFF1基因转录及启动子区NF-κB蛋白结合位点碱基序列区间（效应元件），EMSA检测验证启动子区NF-κB蛋白结合位点。.结果：药物血清组、动物血清组、P65 抗体组作用Hp感染AGS后各组TFF1mRNA表达与其它各组比较，有统计学差异（p<0.05）；不同浓度七方胃痛颗粒药物血清作用H.pylori感染的AGS后，TFF1、p-ERK及NF-κB蛋白表达量与实验对组比较，差异具有统计学意义（P均＜0.05）。加入U0126阻断ERK信号通路后，TFF1蛋白表达量与实验对照组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）；TFF1（Wt）野生株和变异株基因转录表达较空白组均显著增加（p <0.01），TFF1（A）变异株基因表达显著低于Wt株（p<0.01），和其他TFF1变异株相比，差异有统计学意义（p<0.05），变异株之间比较差异无统计学意义（p>0.05）.科学意义：本课题从基因转录和蛋白结合位点水平分析了七方胃痛颗粒对Hp感染胃上皮细胞（AGS）TFF1表达的作用机制，国内外迄今未见利用此技术研究该复方中药作用机制的报道.