疏肝健脾化瘀法抗肝纤维化的miRNA分子药效机制研究

Based on past research, we hypothesis: there are unique changes in miRNA profiles in liver fibrosis. By regulating specific miRNA targets, the Soothing Liver ，Invigorating Spleen and Promoting Blood Circulation Therapies (SIPT) can inhibit liver fibrosis. This research plans to study key gene expressions in signal pathways important to liver fibrosis, utilizing an analysis of the entire genome relevant to liver. By comparing the variation in miRNA expression before and after SIPT , the gene targets in SIPT will be analyzed, and its regulation mechanism will be elucidated from the scope of miRNA. In addition, a computer simulation model of screening and evaluation will be established to study the effects of different SIPTs on miRNAs specific to liver fibrosis, and to explore the gene targets inhibiting liver fibrosis in SIPT . The purpose of this research is to further explore the material base for SIPT in Chinese medicine, and to provide an experimental guidance for scientific selection of different SIPT in clinical applications. At the mean time, this research will provide new modes and methods for modern therapies of Chinese medicine, by utilizing computer simulation technologies to study the properties of Chinese medicine compounds and their interactions with relevant targets.

基于以往的研究基础，我们认为：肝纤维化存在着特异性miRNA变化，疏肝健脾化瘀可能通过特异性miRNA靶点的调节，发挥抗肝纤维化的作用。本研究拟在肝脏全基因组的背景下，研究肝纤维化重要信号通路的关键基因表达，对治疗前后的肝细胞中miRNA基因表达的变化进行比较，分析疏肝健脾化瘀作用的靶向基因，从miRNA水平揭示其抗肝纤维化的调控机制。在此基础上，建立计算机模拟筛选与评价体系，研究疏肝健脾化瘀对肝纤维化特异性miRNA的不同作用，探讨疏肝健脾化瘀法的抗肝纤维化靶点。本研究意义在于深入地揭示中医疏肝健脾化瘀的效应物质基础，也为临床应用疏肝健脾化瘀法的科学选择提供了实验依据。同时，采用计算机模拟技术对中药的化合物性质及其与相关靶点的相互作用进行研究，为现代中医治法的研究提供了新的模式和方法。

本项目对疏肝健脾化瘀法抗肝纤维化作用及其微小核糖核酸（miRNA）的分子药效机制进行了研究，分析了中药抗肝纤维化过程中的血清代谢组谱，从miRNA水平分析了疏肝健脾化瘀法抗肝纤维化的调控机制。主要完成了以下几个方面的研究工作：.（1）通过主成分分析及偏最小二乘法发现中药对CCl4肝纤维化动物模型的代谢紊乱具有显著调控作用，疏肝健脾化瘀法抗肝纤维化作用主要通过相关miRNA调控肌酸、花生四烯酸、甘油磷脂、鞘磷脂、N-酰基乙醇胺合成、脂肪酸、色氨酸等多种代谢通路产生抗肝纤维化作用。.（2）通过细胞模型和小鼠动物模型，分析了与肝纤维化有关的miRNA含量及其所调控的相关蛋白的变化，探讨了miRNA在肝纤维化中的分子调控机制。结果表明a）miR-15b通过抑制Bcl-2 mRNA的翻译来减少Bcl-2蛋白的表达水平，促使HSCs凋亡，从而对肝纤维化起到控制作用；b）miR-130a通过抑制PPAR-γmRNA的翻译，减少PPAR-γ蛋白水平，进而下调FAS的mRNA和蛋白含量，对病变过程进行调控；c）脂质体载体肝脏靶向运输miRNA的研究，为肝脏疾病的治疗和药物开发提供了实验依据。.（3）采用计算机辅助方法建立了肝纤维化相关病症丙型肝炎RNA聚合酶（HCV NS5B polymerase）抑制剂的定量模型，研究了相关药物的定量预测，对神经氨酸酶抑制剂、酪氨酸激酶和表皮生长因子受体抑制剂等进行了分类研究。