EpoR乙酰化对胃癌的早期诊断及作用研究

Gastric cancer is the second most common cause of cancer-related death worldwide and gastric intestinal metaplasia is a former major gastric precancerous lesions. Recent reports in the literature showed that the expression of EPO/EpoR in gastric cancer tissue is higher than in normal gastric tissue. Acetylation is an important form of intracellular protein post-translational modification and it plays an important role in oncogenesis and development of tumor. It may be involved in the regulation of cell proliferation, apoptosis, cell immigration. Our prepare experiment indicates that EpoR can be acetylated and in gastric carcinoma tissue EpoR level was significantly increased while in normal gastric tissue almost no EPOR was observed. In this study, we plan to measure the EpoR acetylation sites in gastric intestinal metaplasia with MS.. EpoR plasmid will be constructed and The specific antibodies of EpoR acetylation will be producted and used . EpoR acetylation expression levels at different grades of the intestinal mucosa and its relationship with early gastric cance will be deeply studied. We will use the primary culture cells of intestinal metaplasia and gastric cancer cells or normal cells for further EpoR acetylation functional studies such as the malignant behavior of cell proliferation, apoptosis, cell migration, invasion, etc. We expect to unravel the molecular mechanisms of gastric cancer formation and discover a molecular target for the earlier diagnosis and therapy of this deadly disease.

胃癌为世界上高发病率和高死亡率的肿瘤之一,胃黏膜肠化为主要的胃癌前病变。近期有文献报道Epo/EpoR在胃癌组织中的表达高于胃正常组织。乙酰化修饰是细胞内蛋白翻译后修饰的一种重要形式，在肿瘤的发生发展有重要作用，其可能通过调控细胞的增殖、凋亡、迁移，从而促进肿瘤的生长和转移。本研究预实验提示EpoR能被乙酰化，胃肠化黏膜组织中EpoR表达水平较正常组织明显增加。本项目欲用质谱分析测定早期胃癌和胃黏膜肠化中EpoR的乙酰化位点，制备特异性EpoR乙酰化抗体，深入研究EpoR乙酰化在不同级别的肠化黏膜组织中的表达水平及与早期胃癌的关系。并构建EpoR 质粒和突变质粒，利用肠化的原代细胞及胃癌细胞或正常细胞明确EpoR乙酰化对细胞增殖、凋亡、细胞迁移、浸润等恶性生物学行为的影响，此研究结果将为我们进一步揭示胃癌形成的分子机理、寻找胃癌早期诊断、生物干预提供理论依据。

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，早期胃癌的生存率可达90%以上，而晚期的生存率只有10-20%。但患者在出现典型临床症状时，往往已经进入了晚期。虽然各个国家都投入了大量的经费对胃癌的早期诊断和治疗都进行了研究，但目前尚无突破性的进展。. EPO-EPOR是新近研究的热点，许多报道表明EPO-EPOR在各种肿瘤如乳腺癌、前列腺癌、子宫癌等20多种肿瘤细胞中均有表达，其与肿瘤的关系越来越密切，有望成为肿瘤治疗中的新靶点。. 蛋白质的翻译后修饰对于调节生物功能有着非常重大的意义,乙酰化修饰是细胞内蛋白翻译后修饰的一种重要形式。众所周知,组蛋白的乙酰化和肿瘤的发生有密切关系。组蛋白的高乙酰化是转录活跃的一个标志,而低乙酰化则与转录抑制有关。临床研究证实,去乙酰化酶抑制剂(HDAC inhibitors), 如 SBHA,SAHA, MS-275, SNDX-275 等对于肿瘤有很好的治疗效果。因此本研究欲进一步明确在胃癌中的EPOR的乙酰化水平及其与胃癌细胞增殖、存活等关系，为胃癌的诊断和治疗提供新的线索。. 本研究应用免疫组化和RT-PCR检测正常胃粘膜、胃癌标本的EPO／EPOR的表达水平，EPOR乙酰化水平；应用western blot技术，检测胃癌细胞株AGS，MKN45，SGC7901中EPOR和乙酰化的EPOR的表达水平，并观察在EPO的作用下，EPOR乙酰化水平的变化，并检测胃癌细胞中Epo刺激后引起的下游基因stat5a、 erk等磷酸化水平；构建EPOR质粒，用点突变构建KR突变体，用cck-8及克隆形成试验检测EPOR野生型及EPOR突变体对胃癌细胞增殖的影响，用Annexin V法检测EPOR野生型及EPOR突变体对胃癌细胞凋亡的影响；经验证，EPO/EPOR及其乙酰化水平在胃癌组织中的表达明显高于正常组；在细胞水平上，胃癌细胞的EPO/EPOR及其乙酰化水平表达升高，且在EPO的刺激下，促进AGS细胞的生长，加快胃癌细胞的迁移并影响细胞的凋亡。因此，临床应谨慎选择 EPO 来改善肿瘤患者的贫血状态。另外,由于 EPO/EPOR 对胃癌有促进生长以及预后差的作用,我们预期其可以作为治疗中的靶向目标,抑制 EPOR 的表达,有可能促进肿瘤的逆转,延缓生长,改善预后,提高患者生活质量,延长患者的生存期。