施万细胞在周围神经趋化性生长中的作用机制研究

The appropriate reinnervation of motor and sensory axons after peripheral nerve injury is important for the functional recovery. Understanding the mechanisms of Schwann cells in specificity of peripheral nerve regeneration will efficiently promote the functional recovery of injured nerve. In this study, quantitative proteomics will be applied to analyze the protein profiles of sensory and motor Schwann cells, the secreted proteomes of sensory and motor Schwann cells, as well as the plasma membrane proteomes of sensory and motor neurons. Differentially expressed proteins will be categorized according to their main biological functions and the signal transduction pathways will be analyzed by bioinformatics. With the databases of differential secreted proteins in Schwann cells and differential plasma membrane proteins, we can discover some key proteins which may play important roles in the specificity of nerve regeneration. Sensory and motor nerve transection model and regeneration model will be established to observe the changes of key proteins. And the mechanisms of these proteins will be analyzed in Schwann cells and neurons co-culture models in vitro and nerve regeneration model in vivo. It is anticipated that this study will provide a solid foundation for understanding the mechanisms of Schwann cells in specificity of peripheral nerve regeneration.

周围神经损伤修复过程中再生感觉和运动神经的准确对接对于神经功能的恢复具有重要意义，其中感觉和运动施万细胞在神经趋化性生长过程中发挥了重要作用，充分了解其作用机制有助于促进损伤神经的功能修复。本课题拟采用定量蛋白质组学技术建立大鼠感觉与运动施万细胞全蛋白质组和分泌蛋白谱、感觉与运动神经元膜蛋白谱，并获得差异蛋白，通过生物信息学对差异蛋白进行功能分类和信号通路网络分析，从蛋白水平分析感觉和运动施万细胞功能差异的物质基础以及神经元与施万细胞间的相互作用和调控网络，发现神经趋化性生长过程中的关键蛋白。制备大鼠感觉和运动神经损伤及再生模型，分析关键蛋白在损伤及再生中的表达变化。并通过体外细胞行为学和体内再生模型分析这些关键蛋白在感觉和运动神经趋化性生长中的作用，阐明施万细胞在神经趋化性生长中的作用机制，为施万细胞生物学功能研究及周围神经趋化性生长学说提供新的理论，为提升周围神经修复水平提供新的思路。

本研究采用蛋白质组学分析技术，通过大鼠、小鼠体外细胞学研究，建立了感觉和运动施万细胞蛋白表达谱、分泌蛋白谱，以及感觉和运动神经元蛋白表达谱。比较了感觉和运动施万细胞、感觉和运动神经元蛋白表达谱及其膜蛋白的表达差异。研究发现施万细胞分泌蛋白有688个，涉及细胞增殖和迁移、血管发生、神经突起发生、轴突相关等功能；感觉与运动施万细胞蛋白质表达谱存在108个差异蛋白质，主要涉及蛋白合成、细胞增殖、能量代谢、神经发生、染色体稳定、轴突导向等功能；感觉与运动神经元蛋白质表达谱有227个差异蛋白质，主要涉及受体和信号、轴突和骨架、代谢、细胞周期、线粒体和能量代谢等功能，其中差异表达膜蛋白35个。通过生物信息学技术对差异蛋白进行功能信号通路网络分析，推测Sema3A、Sema3E及相关受体Plexin、Nrp1（Neuropilin1）在感觉和运动神经趋化性生长中有重要作用；通过体外细胞生物学实验发现Sema3A和Sema3E对感觉和运动神经元的生长存在选择性抑制，对感觉神经元生长的抑制作用更强；Sema3A在单纯感觉和运动神经损伤后在运动神经的远侧端表达高于感觉神经；提示在神经趋化性生长过程中Sema3A和Sema3E及其受体可能是其中发挥重要作用的因子之一。研究还发现，感觉和运动神经组织中的2种成纤维细胞蛋白质表达谱也存在差异，主要涉及到轴突引导、再生、免疫反应、突轴可塑性、细胞增殖、细胞粘附、细胞迁移、血管发生等功能。本研究结果表明感觉和运动神经趋化性生长过程中施万细胞发挥重要作用，成纤维细胞可能也参与其中，提示此过程是一个复杂的生物学过程，是由多种因素共同作用的结果。通过研究丰富了周围神经趋化性生长学说，为临床神经损伤修复提供新的思路。