AEBP1在HCV感染诱导的肝脏慢性炎症及脂代谢紊乱中的作用机制研究

Hepatitis C virus (HCV) is a major cause of chronic liver disease including hepatitis, liver steatosis and hepatocellular carcinoma. The development of chronic liver disease remarkably minimizes life qualities of HCV infected patients and reduces the effect of antiviral therapy. In recent years, roles of macrophages in hepatitis attracted more and more attentions. Co-cultured with macrophages induced up-regulation of inflammatory mediators in hepatocytes. Adipocyte enhancer-binding protein 1 (AEBP1) is an ubiquitously expressed transcriptional repressor with widely expression in adipose tissues, liver, lung, spleen and brain. In macrophages, AEBP1 was found be involved in the regulation of inflammation and lipid metabolism. Whether AEBP1 could play similar roles in HCV infected liver cells stays still unknown. In the present study, we found that HCV infection induced up-regulation of AEBP1 in vitro, which suggested that AEBP1 levels be related with HCV infection. Furthermore, relationship between them will be conformed with liver biopsy tissues and PBMC taken from HCV infected patients. Next, level of AEBP1 in macrophages co-cultured with HCV stably-replicating cells will be detected and pathways of AEBP1 regulating inflammatory and lipid matablism will be identified. In a word, our study aimed to add more information about the pathogenic mechanism of chronic liver disease induced by HCV infection which might provide new candidate targets for HCV therapy.

丙型肝炎病毒（HCV）感染会引发肝脏慢性炎症、脂肪变性等慢性病理变化。慢性肝病的产生不仅严重影响了HCV感染者的生存质量，更降低了抗病毒治疗的效果。近年来巨噬细胞在肝炎发生中的作用受到日益重视，巨噬细胞和肝细胞共培养可诱导肝细胞炎症表型。脂肪细胞增强结合蛋白1（AEBP1）是一种转录抑制因子，已证实该分子可调节巨噬细胞中炎症及脂代谢相关分子表达水平，然而该分子在HCV感染的肝细胞中能否发挥类似作用目前还不得而知。本项目在体外试验中观察到HCV感染明显上调肝细胞AEBP1表达水平，初步判断AEBP1上调与HCV感染相关，拟在大样本量HCV慢性感染者PBMC及肝组织标本验证两者间的相关性，并进一步在体外试验中探索AEBP1上调对肝细胞炎症反应及脂代谢通路的影响，以期揭示AEBP1在HCV感染引发的肝脏病理反应中的作用机制，为HCV感染引起的慢性肝病治疗和干预提供候选靶标。

本课题旨在探索AEBP1分子介导HCV感染相关的炎症反应和脂代谢紊乱中的作用，试验内容依据计划书展开，经费严格按照预算支出，按时提交项目进展报告，目前研究内容已基本完成，达到了预期研究目标，获得了相应的研究成果。1. 通过检测HCV慢性感染者和健康人PBMC中AEBP1表达水平，发现慢性HCV感染者PBMC中AEBP1表达水平高于健康体检者。2. 通过建立HCV持续感染肝细胞Huh7细胞模型，检测细胞内AEBP1水平变化。结果显示，HCV持续感染的Huh7细胞中，AEBP1表达水平升高。进一步对检测HCV感染不同时间后Huh7细胞内AEBP1的表达水平，发现HCV感染7天后，AEBP1蛋白水平开始升高；HCV感染13天时，AEBP1表达水平显著增强。3. 克隆AEBP1编码区的cDNA，构建到慢病毒表达载体，将上述质粒和慢病毒包装质粒一起转染293T细胞，制备AEBP1过表达的慢病毒，感染Huh7细胞，通过嘌呤霉素筛选获得了稳转细胞株。4. AEBP1过表达促进肝细胞炎症因子的表达，AEBP1过表达的Huh7细胞内炎症因子IL-6、IL1β和TNFα表达升高；HCV感染后，炎症因子IL-6、IL1β和TNFα的表达水平更高。进一步研究发现，AEBP1的过表达促进了NF-κB的磷酸化，AEBP1蛋白通过与IκBα结合，促进IκBα的磷酸化降解，进而激活NF-κB通路，促进炎性因子IL-6、TNF-α等的释放，首次证实肝细胞中AEBP1参与NF-κB信号通路的调节。5. AEBP1阻碍肝细胞内脂质代谢，研究发现AEBP1过表达的Huh7细胞，其PPARγ-1和LXRα蛋白水平以及ABCA1、ABCG1蛋白表达水降低；HCV感染的AEBP1过表达的Huh7细胞中，PPARγ-1和LXRα蛋白表达降低，ABCA1、ABCG1表达下调，肝细胞内胆固醇水平升高。另一方面，AEBP1的过表达，抑制肝细胞PPARα表达，进而抑制脂肪酸氧化相关蛋白CPT1A的表达，导致肝细胞中甘油三酯的堆积。我们的研究证实AEBP1参与肝细胞脂代谢紊乱的调节，进一步拓展了HCV慢性感染引起的脂代谢的机制。本课题的研究阐明了肝细胞AEBP1蛋白参与HCV感染引起的炎症反应和脂代谢，为HCV感染引起慢性肝病的病理机制提供了新的内容。本项目的研究成果发表论文7篇，其中SCI论文4篇，申请发明专利3项。