HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路在急性胰腺炎组织中的级联响应及大黄牡丹汤的干预效应

A theory that is excessive activation of white blood cells-cascade response of inflammatory factors considers occurrence of AP is related to sustained release of inflammatory mediators. Traditional Chinese medicine holds that AP＇s main pathogenesis is stasis-heat resistance and Dahuangmudan decoction has firm clinic practice in treating AP. Combined with previous work foundation, this project establishes a working hypothesis of possible mechanism of cascade response of HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB signaling pathway in acute pancreatitis tissues and Dahuangmudan decoction＇s interfering effects. As an object with AP rats, during the course of AP, our group observes cascade response and correlation of HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB signaling pathway key molecules and downstream cytokines TNF-α, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, iNOS, INF-γ in pancreatic tissue. Meanwhile giving Dahuangmudan decoction for intervention treatment, we intend to observe the impact of the preparation for gene protein, phosphorylation level and downstream cytokines of HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB signaling pathway key molecules. The purpose is to research mechanism of action of Dahuangmudan decoction treating AP from the perspective of RAGE/TLRs-NF-κB signaling pathway induced by HMGB1, providing theoretical basis and scientific support for clinical application of this preparation.

“白细胞过度激活－炎性因子级联瀑布效应”在AP发生发展中具有重要作用，根据AP腹痛、发热或并发脓肿等特征，中医认为瘀热内阻为主要病机；且早期以大黄牡丹汤治疗疗效显著。本课题结合前期工作建立“HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路在急性胰腺炎组织中的级联响应及大黄牡丹汤干预效应的可能机制”工作假说，以AP大鼠为对象，观察AP病程中胰腺组织HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB通路关键分子及下游细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、iNOS、INF-γ级联响应及其相关性；同时给予大黄牡丹汤干预治疗，观察该制剂对AP大鼠胰腺组织中HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB通路关键分子基因蛋白及其磷酸化水平、下游细胞因子的影响，拟从HMGB1介导的RAGE/TLRs-NF-κB通路角度探讨大黄牡丹汤治疗AP的作用机制，为该制剂临床应用提供理论依据。

“白细胞过度激活－炎性因子级联瀑布效应”在急性胰腺炎（Acute pancreatitis，AP）的发生发展中具有重要作用，本研究基于阻断炎症级联放大，以及中医学中认为AP为热伤血络、瘀热内阻而发为脘腹剧痛，治疗以“泻热通里攻下”以应“六腑以通为用”之旨等要素，依据前期工作并结合HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路能介导大量促炎介质释放，导致炎症反应持续发生的情况，建立“HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB网络信号通路关键分子在AP胰腺组织中的级联响应及大黄牡丹汤的干预效应的可能机制”工作假说，以急性胰腺炎大鼠为研究对象，在观察大鼠胰腺组织中HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB通路关键分子HMGB1、RAGE、TLR2/4、MyD88、IRAK-2、IRAK-4、NF-κB及下游细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、iNOS、INF-γ的表达情况；同时给予大黄牡丹汤干预治疗，观察该制剂对大鼠胰腺组织中HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB通路关键分子基因蛋白及其磷酸化水平、下游细胞因子的差异影响，拟从HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路探讨大黄牡丹汤治疗AP的作用机制和科学内涵。.在研究中，课题组以中医理论作为基础，通过生化、病理、透射电镜、Tunnel染色、RT-PCR、IFC、IHC以及Western Blot等多种方法检测大鼠胰腺病理改变，超微结构变化，胰腺组织凋亡，炎性因子含量，信号通路关键分子基因及蛋白表达情况，探讨了急性胰腺炎模型大鼠胰腺组织中HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路中关键分子及下游细胞因子的级联响应及其相关性，并通过观察大黄牡丹汤的干预效应，探讨了大黄牡丹汤治疗AP的作用机制和科学内涵，完成了相关研究工作。本研究结果提示急性胰腺炎以炎症为主导的病理改变机制与HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB通路响应所介导的炎症级联反应关系密切，而大黄牡丹汤能够抑制该信号通路关键分子基因蛋白表达，减轻胰腺组织炎症反应，为该制剂的临床应用提供基础支持和理论依据。