基于M受体和β受体交互作用的针刺调节膀胱兴奋性的作用机制研究

M receptors and βreceptors in bladder are important factors, which regulate the bladder contraction and relaxation in order to maintain the normal bladder urination storage activities. The cross talk between M and βreceptors is the important mechanism of the urinary continence center, plays a regulatory role, the dysfunction would result in bladder overactivity.Our clinical studies have shown that acupuncture can specifically regulate urodynamic state of overactive bladder and improve the symptoms of voiding dysfunction,and also can inhibit M2、M3 nerve receptors mRNA and protein expression, increase β3 mRNA and protein expression in bladder. These were the preliminary finding that acupuncture adjusting bladder activity and cholinergic and adrenergic receptors exist between a connection.In this study,the overactive bladder rats will act as study object, biochemical technology such as Histochemistry,Laser confocal microscopy, RT-PCR, Western Blotting, Calcium imaging,will be applied to explore the function and cross talk between M receptors and βreceptors in bladder, research on the effects of acupuncture regulation, analyse the correlation among the bladder dynamics change, detrusor cells contraction and relaxation change，and cross talk of M receptors and βreceptors, reveal the mechanisms of acupuncture regulating bladder irritability, provide the new experimental basis for theoretical interpretation of meridian-viscera correlation.

膀胱胆碱能M受体及肾上腺素能β受体是调节膀胱舒缩功能的重要因素，两者交互协调作用维持正常的膀胱储排尿活动，而两者功能的异常将导致膀胱过度活动。我们前期研究表明，针刺能有效调节不稳定膀胱大鼠尿动力学状态，改善排尿症状；能有效抑制不稳定膀胱大鼠膀胱M2、M3受体mRNA和蛋白表达，对β3受体mRNA和蛋白表达有增高的趋势，初步发现针刺调节膀胱兴奋性与胆碱能及肾上腺素能受体之间存在一定的联系。本研究以不稳定膀胱大鼠为研究对象，借助神经组织化学法、激光共聚焦显微镜、Western Blotting、钙离子成像、尿动力学等检测技术，进一步探讨膀胱胆碱能神经及肾上腺素能神经受体之间的交互作用，分析针刺影响大鼠不稳定膀胱中M受体与β受体交互作用效应、膀胱动力学变化及膀胱逼尿肌细胞舒缩变化特点的相关性，揭示针刺调节膀胱兴奋性的作用途径及机制，为经穴脏腑相关性的理论阐释提供新实验依据。

目的：探讨膀胱胆碱能神经及肾上腺素能神经受体之间的交互作用，分析针刺影响大鼠不稳定膀胱中M受体与β受体交互作用效应、膀胱动力学变化及膀胱逼尿肌细胞舒缩变化特点的相关性，揭示针刺调节膀胱兴奋性的作用途径及机制。.方法：将SPF级雌性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组、M受体激动剂组、M受体激动剂+针刺组、β受体阻断剂组、β受体阻断剂+针刺组。采用腹腔内注射环磷酰胺方法建立OAB大鼠模型，各组给予相应处理后，进行尿动力学及膀胱逼尿肌组织生化指标测定和分析。.结果：1.OAB模型大鼠膀胱有效容量明显减少，排尿压力明显降低，同时膀胱组织中M2、M3受体数量、mRNA及蛋白表达量增多，β3受体数量、mRNA及蛋白表达量减少，膀胱逼尿肌细胞钙离子震荡幅度增加，震荡频率增快，OAB大鼠模型成立。2.针刺能有效增加OAB模型大鼠膀胱有效容量，提高膀胱排尿压力。3.针刺能有效降低OAB模型大鼠膀胱逼尿肌细胞钙离子震荡幅度及频率，从而降低膀胱逼尿肌细胞兴奋性。4.正常大鼠膀胱灌注M受体激动剂后M2、M3受体数量、mRNA及蛋白表达量增多，β3受体数量、mRNA及蛋白表达量降低，膀胱逼尿肌细胞钙离子震荡幅度及频率增加，给予针刺治疗后M2、M3受体数量、mRNA及蛋白表达量较前减少，β3受体数量、mRNA及蛋白表达量增多，膀胱逼尿肌细胞钙离子震荡幅度及频率较前降低。正常大鼠膀胱灌注β受体阻断剂后β3受体数量、mRNA 及蛋白表达量降低，M2、M3受体数量、mRNA 及蛋白表达量增多，膀胱逼尿肌细胞钙离子震荡幅度及频率增加，给予针刺治疗后β3受体数量、mRNA及蛋白表达量较前增多，M2、M3受体数量、mRNA及蛋白表达量减少，膀胱逼尿肌细胞钙离子震荡幅度及频率较前降低。.结论：膀胱胆碱能M受体与肾上腺素能β受体之间可能存在相互抑制的交互作用，两者协调作用维持膀胱正常舒缩功能，相互作用发生异常导致膀胱逼尿肌兴奋性增高。针刺通过对M受体及β受体功能及其状态的调节效应是其治疗OAB的作用机制之一。