Stathmin调控整合蛋白/FAK信号通路在胆管癌上皮间质转化中的作用和机制研究

Cholangiocarcinoma has a strong ability of invasion and metastasis, low rate of excision and poor prognosis. It is a difficult problem for the realm of surgery. Stathmin is highly expressed in cholangiocarcinoma and it had been selected and identified in our preliminary research. It has been considered to have a great relationship with the progress of tumor in recent researches. Further research indicate that Stathmin promote invasion and metastasis of cholangiocarcinoma cell and related to epithelial-mesenchymal transition(EMT), however the mechanism is still unknown. Therefore we suppose that Stathmin promote EMT of cholangiocarcinoma via regulating integrin/FAK singal pathway and then it promote invasion and metastasis. We hope to clarify the effect of stathmin regulating integrin/FAK singal pathway in EMT of cholangiocarcinoma, quest for the molecular mechanism via EMT model of cholangiocarcinoma cell，transplantation tumor model in nude mice and human cholangiocarcinoma tissue microarray in this program, using RNAi and western blot technique, from vivo to vitro, from basic to clinic, expecting to find a new prognosis index and therapeutic target for diagnosis and clinical treatment of cholangiocarcinoma.

胆管癌侵袭转移能力强、手术切除率低、预后差，是外科界的一道难题。我们在前期研究中筛选并鉴定出Stathmin蛋白质在胆管癌中高表达。而近期研究认为其和肿瘤进展密切相关。进一步的预实验结果提示Stathmin促进胆管癌细胞侵袭迁移且和上皮间质转化( epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关，但其作用机制仍不明确。为此我们提出假说：Stathmin通过调控整合蛋白/FAK信号通路促使胆管癌发生EMT，从而促进侵袭转移。本项目拟通过人胆管癌EMT细胞模型、裸鼠移植瘤模型和人胆管癌组织芯片，采用RNA干扰、Western blot等技术，从体外到体内、从基础到临床多方位验证假说，旨在阐明Stathmin调控整合蛋白/FAK信号通路在胆管癌EMT中的作用，探索其分子机制，以期为胆管癌的临床诊治提供新的预测指标和治疗靶点。

胆管癌是一种罕见但高度致命的恶性肿瘤，其发生发展机制仍不明确，高效的治疗靶点对于改善其预后至关重要。基于蛋白质组学技术，我们分别对比分析了胆囊癌细胞株、胆管癌细胞株和两者的良性细胞株，结果发现253和231个差异表达斑点，并使用质谱分析和数据库检索，选择了七种明显差异表达的蛋白质。在胆管癌和胆囊癌细胞中均发现Stathmin高表达。在胆管癌的癌和癌旁组织中使用免疫组化和蛋白质印迹验证Stathmin表达，进一步研究揭示Stathmin高表达与抑制星形孢菌素诱导的胆管癌细胞凋亡有关。此外，我们发现Stathmin通过蛋白激酶B（Akt）和细胞外信号调节激酶（ERK）促进癌细胞增殖并抑制其凋亡。整合素β1似乎作为Stathmin诱导ERK和Akt信号传导的上游调控，促进其抑制胆管癌细胞凋亡。了解Stathmin对抗凋亡作用的调节可能为如何克服胆管癌的治疗耐药提供新的见解。此外，Stathmin 1（STMN1）的异常表达在胆囊癌的增殖和迁移中起重要作用。为了探讨STMN1在胆囊癌患者手术后的预后意义。对2009年至2013年期间本中心的70例胆囊癌患者的肿瘤组织进行免疫组化评估STMN1表达。统计分析STMN1表达与临床病理学特征和预后之间的相关性。STMN1在肿瘤组织中的高表达与肿瘤分化差（P <0.001），淋巴结转移（P = 0.028），TNM分期（P = 0.011）和总生存期（P <0.001）相关。Cox多因素分析发现STMN1表达可以作为一个独立的预后因素。STMN1表达联合TNM分期可以为胆囊癌患者提供更好的临床预测模型。此外，在TNM III-IV期的患者中，低表达STMN1的患者能够明显从术后辅助化疗获益。因此我们得出结论：STMN1高表达可能是胆囊癌患者术后不良预后的独立危险因素，并且可结合TNM分期系统提高对总生存率的预测精度。对低表达STMN1的晚期胆囊癌患者进行术后辅助化疗能够明显改善其生存预后。