整合素miRNA靶基因3'UTR内SNPs与胃癌侵袭与转移的关系及后续功能分析

近期研究表明，miRNA 靶基因3′UTR 内存在的SNPs影响了miRNA 与靶基因结合导致基因表达失调，与胃癌的侵袭与转移之间具有显著相关性，但SNPs调控胃癌侵袭与转移的分子机制尚不清楚。申请者前期研究发现，整合素基因的3′UTR 区miRNA靶点内SNPs与胃癌的局部浸润深度具有显著相关性。为探讨miRNA 靶基因3′UTR 内SNPs是否以及如何参与与胃癌侵袭与转移，本课题拟采用生物信息学方法在整合素基因的3′UTR 内预测目前已知miRNA的结合靶点，在靶点内筛选候选SNPs。利用HRM技术，在不同临床程度的胃癌患者与正常对照人群中对候选SNPs进行基因分型，筛选出差异性SNPs，并验证其与胃癌侵袭与转移的关联性，通过分子生物学方法深入研究这些SNPs在胃癌侵袭与转移发生过程中的分子信号通路以及与相关miRNA的作用机制，为最终阐明遗传变异影响胃癌侵袭与转移的分子机理奠定基础。

本课题研究了整合素miRNA靶基因3'UTR内SNPs与胃癌侵袭与转移的关联性，探讨这些SNPs在胃癌侵袭与转移发生过程中的分子信号通路以及与相关miRNA的作用机制。6个SNPs的基因分型结果显示：rs2675位点CC基因型个体较AA基因型个体患胃癌风险明显降低，提示携带rs2675位点AA基因型的个体有较高的患胃癌的风险。分析SNPs与胃癌侵袭与转移以及其它临床资料的关系，结果显示：携带rs2675 AA基因型和rs17664 GG基因型和G等位基因的个体胃癌分期处于1b期的风险明显低于1a期；携带rs17664 GG基因型和G等位基因的个体胃癌淋巴结转移处于3b期的风险明显高于0期；携带rs3809865 AA基因型和A等位基因的个体胃癌临床分期处于4期的风险明显高于1a期。SNP功能研究结果显示：miR124-3p与整合素基因3'UTR区SNP rs3809865结合，上调基因表达，miR-124-3p与rs3809865A的结合能力显著强于rs3809865T；miR-578与整合素基因3'UTR区SNP rs2675结合，上调基因表达，miR-578与rs2675A的结合能力显著强于rs2675C；miR-4484与整合素基因3'UTR区SNP rs17664结合，上调基因表达，miR-4484与rs17664G的结合能力显著强于rs17664A。调控miRNA成熟通路相关基因SNPs与胃癌的关系研究，结果显示：rs3742330位点GG基因型个体较AA基因型个体患胃癌风险明显降低，携带rs3742330 G等位基因较A等位基因患胃癌风险降低27%。提示携带rs3742330位点AA基因型和A等位基因的个体有较高的患胃癌的风险。rs3742330位于DICER 3'UTR 区hsa-miR-632结合靶点区，G等位基因通过破坏DICER mRNA的局部结构改变了miRNA-mRNA结合的亲和力，从而上调DICER表达。携带rs3742330 AA基因型的个体胃癌淋巴结转移处于1期的风险明显低于0期；携带rs7813 CC基因型和C等位基因的个体胃癌淋巴结转移处于3期的风险明显低于0期；携带rs7813 CT基因型的个体不易发生胃癌远处转移。在本课题的资助下，已发表SCI论文6篇，国内核心期刊5篇。