血管紧张素Ⅱ对正常及HO-1过表达转基因小鼠肾脏远曲小管管周膜钾、氯通道活性影响的调控

Renal distal convoluted tubule (DCT) plays a key role in renin-angiotensin-aldosterone system which contributes to maintaining salt and water balance in the body. Chloride channels and potassium channels in the basolateral membrane of DCT play an important role in NaCl reabsorption in this nephron. Extracellular angiotensin II (AngII), O2- and NO may regulate the apical Na+-Cl- cotransporter by modulating the basolateral chloride channels and potassium channels in DCT thereby change urine output of the body. Recent studies show that HO-1 induction attenuates the develepment of AngII-dependent hypertension. However, detailed mechanisms that HO-1 prevents hypertension remains unknown. Patch clamp experiments and molecular biology techniques will be performed to examine effects of AngII on basolateral K and Cl channels in DCT and the mechanisms by which HO-1 prevents AngII-induced hypertension. It may be beneficial in the treatment of hypertension to explore the potential therapeutic avenues as well as novel therapeutic drugs that are being developed targeting HO-1 system in the kidney.

肾脏远曲小管在机体水盐平衡方面起着十分重要的作用，是肾素-血管紧张素-醛固酮系统作用的关键部位。远曲小管管周膜钾、氯通道在该段肾小管对NaCl的主动重吸收中扮演重要角色，细胞外液中的AngII、O2-等物质，有可能通过对管周膜钾、氯通道活性的影响，调控管腔膜侧钠-氯同向转运体的活动，使远曲小管对NaCl的主动重吸收发生改变，从而影响血压稳定。近年研究表明诱导HO-1表达能够拮抗AngII引起的血压升高。然而，诱导HO-1降低血压的确切机制，是否由其自身或其代谢物CO、胆红素等在AngII对远曲小管管周膜钾、氯通道的影响中发挥作用所致，目前尚无报导。本研究将利用单通道膜片钳及分子生物学技术，通过体内、外实验，研究HO-1系统在AngII对正常及HO-1过表达转基因小鼠肾远曲小管管周膜钾、氯通道活性影响中的作用，探究发展针对肾脏HO-1系统特定靶向作用的药物，以期为临床上治疗高血压提供新思路。

肾脏远曲小管在机体水盐平衡方面起着十分重要的作用，是肾素-血管紧张素-醛固酮系统作用的关键部位。远曲小管管周膜氯通道在该段肾小管对NaCl的主动重吸收中扮演重要角色，细胞外液中的血管紧张素II（AngII）有可能通过对管周膜氯通道活性的影响，调控管腔膜侧钠-氯同向转运体的活动，使远曲小管对NaCl的主动重吸收发生改变，从而影响血压稳定.研究中应用免疫印迹（western blot）技术探讨AngII对肾脏外髓内带（ISOM）作用的不同时间及不同浓度对PKC（PKCα、PKCξ）、p47phox及c-Src蛋白质表达和磷酸化水平的影响。研究发现，50nmol/L 的AngII在不同的时间点及不同浓度不能明显改变PKC亚型（PKCξ）的蛋白磷酸化水平，但 50nmol/L的AngII可明显增加 PKC亚型（PKCα）、p47phox及c-Src的磷酸化水平，而且对 PKCα、P-p47phox及P-c-Src磷酸化水平的影响在 5min 时最明显。给予不同浓度的AngII时发现，随着浓度的增加，P- PKCα、P-p47phox及P-c-Src 的表达逐渐增加。在 PKC 阻断剂Calphostin C存在时 ，50nmol/L 的AngII不能明显升高 P-p47phox及P-c-Src的表达；在 PLC抑制剂U73122存在下，50nmol/L 的AngII不能明显增加P-c-Src表达，这说明AngII是通过PLC-PKC途径可能对远曲小管10-pS氯通道进行调节的。在AngII受体AT1受体阻断剂Losartan存在时，50nmol/L 的AngII不能增高 PKCα、p47phox及c-Src蛋白质的磷酸化水平，而AngII受体AT2受体阻断剂PD123319存在时，50nmol/L 的AngII依然能增高 PKCα、p47phox及c-Src蛋白质的磷酸化水平，说明AngII是通过 AT1受体介导发挥作用的。.本研究初步证实：.1、AngII对正常大鼠肾脏外髓内带DCT管周膜10-pS氯通道的激活涉及PKC信号转导途径。.2、AngII对正常大鼠DCT外髓内带管周膜10-pS氯通道的激活是通过AngII的受体AT1介导完成的。.本研究一定程度上揭示了肾脏远曲小管10pS氯离子通道功能及其及调控机制，进一步完善了肾脏远曲小管对 NaCl的重吸收过程