婴幼儿血管瘤血清标志物的寻找、鉴定及临床应用研究

血管瘤是最常见的婴幼儿良性肿瘤，发病率高达1%，但尚无理想的治疗方法，过于积极的治疗可能造成严重的医源性外观破坏及全身副作用。血管瘤病程伴有血清学的异常，但尚未发现血清标志物，临床上缺乏评估瘤体增殖潜能及治疗预后的指标。本课题组最早发表了血管瘤血清学VEGF研究的论著,被国际脉管病研究学会发布的分类文件所引用，是本课题的重要研究基础。为了寻找可应用于临床的血清标志物,我们利用先进的基因芯片检测血管瘤增生消退期自身对照组织，首次进行系统全面的筛查。经针对分泌蛋白高效筛查，检测其血清浓度，验证组织表达，首次发现潜在的血管瘤血清标志物- - 血管生长素，其血清浓度与病程相关、特异度敏感度强，既往血管瘤研究未见报道，属源头创新。现备行前瞻性临床应用研究，分析其临床价值，旨在为临床提供评估血管瘤增殖潜能及治疗预后的血清监测因子，以辅助治疗时机、治疗方式及停药时间的决策，提高血管瘤综合治疗水平。（请保密

【背景与目的】.血管瘤是最常见的婴幼儿良性肿瘤，也是唯一的血管生成天然模型。其特征性表现为早期快速增生，后期缓慢消退。由于瘤体增殖潜能难以预测，各种治疗方式的选择和应用难以适时适度。为了平衡治疗的安全性和有效性，急需寻找到一种能监测瘤体增殖潜能的血清标志物。但目前寻找肿瘤血清标志物仍富于挑战性，至今未见类似血管瘤血清标志物的报道。.【材料与方法】.利用同一血管瘤的增生、退化期自身对照标本，以基因芯片检测差异表达基因，从中筛查编码分泌蛋白的基因，筛选可能的血清标志物。之后，以qRT-PCR、免疫组化、Western blot验证其在血管瘤组织中的mRNA及蛋白表达水平，以ELISA法检测该因子在患儿血清和尿液中的表达水平。最后，分析血管瘤增生早期血清中该因子及VEGF的浓度变化程度和瘤体增殖程度的相关性，并选取该因子血清水平较稳定的浅表或混合型病例，进行自身对照研究，半侧瘤体不作治疗，观察后期增生趋势，另半侧以咪喹莫特软膏外涂，分析其疗效和安全性。.【结果】.基因芯片检测发现62个增生期高表达的差异表达基因。利用新的筛选方法，我们发现缺氧诱导的分泌型血管生成因子——血管生长素（angiogenin，ANG）可能是潜在的血管瘤血清标志物。之后，验证得血管瘤增生、退化期组织中ANG在mRNA及蛋白水平均存在差异表达，患儿血清和尿液中ANG浓度变化与增生退化病程相关，并且ROC曲线分析提示具有较强的敏感度和特异度。继而，分析得增生早期血清中ANG浓度变化和瘤体增殖程度具相关性，而VEGF无此相关性。自身对照研究中，未治疗侧瘤体93.8%增大程度小于20%，治疗侧有效率达81.3%，局部副反应较轻，无全身副反应。.【结论】.ANG是一种新的有意义的血管瘤血清标志物，在血管瘤增生早期监测血清ANG水平，可能有助于评估瘤体的增殖潜能。对于增生早期血清ANG水平稳定的浅表或混合型血管瘤，外涂咪喹莫特软膏是安全有效的治疗方式。应用基因芯片检测肿瘤组织差异表达基因，从中筛查编码分泌蛋白的基因，是一种便捷有效的寻找潜在的肿瘤血清标志物的新方法。