转IL-17Ra基因羊水干细胞对慢性重型乙型肝炎治疗的基础研究

Th17细胞分泌过量IL-17导致免疫功能紊乱和阻断特异性抗病毒免疫应答，并且IL-17通路激活是慢性乙型重型肝炎发病的重要机制之一；研究表明移植后的干细胞仍受肝内免疫紊乱及病毒再感染的攻击；前期我们研究示羊水干细胞（AFSCs）具有较强的增殖和分化能力，同时又避免胚胎干细胞伦理限制；项目拟采用慢病毒载体将外源IL-17受体拮抗剂(IL-17Ra)基因转入AFSCs内，建立稳定的高表达IL-17Ra的AFSCs细胞系；应用HepG2.2.15细胞和HBV转基因小鼠作为载体，在体内外研究转IL-17Ra基因的AFSCs对HBV复制的抑制和下调肝内Th17细胞活化的过强免疫通路的激活；研究转IL-17Ra基因AFSCs在体内外对HBV复制以及免疫状况的干预机制；本项目的实施，对探讨AFSCs对慢性乙型重型肝炎治疗提供新的切入点，为转基因干细胞对重症肝病治疗提供重要的研究基础，具有重要科学价值。

本研究采用体外构建慢病毒过表达IL-17受体拮抗剂(IL-17Ra)载体,转染羊水干细胞(AFSCs)构建稳定表达IL-17Ra羊水干细胞系,采用流式细胞仪、免疫荧光、ELISPOT、RT-PCR等分子生物学手段，分别在HepG2.2.15细胞和HBV转基因小鼠肝衰竭模型载体实验，首次发现：1）首次构建IL-17Ra基因修饰AFSCs细胞系；2）慢病毒载体IL-17Ra基因修饰AFSCs仍具有较强增殖潜能和肝细胞方向分化潜能以及稳定的遗传性；3）在体内外IL-17Ra基因修饰AFSCs分别在一定程度上能抑制HepG2.2.15细胞内和HBV转基因小鼠肝衰竭模型体内HBV的复制；4）IL-17Ra基因修饰AFSCs能下调肝内Th17细胞活化的过强免疫通路的激活；靶向阻断由Th17细胞分泌过量IL-17导致免疫功能紊乱和阻断特异性抗病毒免疫应答；5）IL-17Ra基因修饰AFSCs可以改善HBV转基因肝衰竭小鼠的肝功能以及生存期。上述研究结果证实了我们提出的假说“过表达IL-17Ra的AFSCs可以抑制慢性乙型重型肝炎肝内免疫炎症反应以及HBV复制，为慢性乙型重型肝炎的治疗提供新的切入点。