miR-744下调TGF-β影响MSCs功能参与SLE发病机制研究

Our previous studies demonstrated that MSCs in patients with SLE have abnormalities compared with those in normal control. MSCs may play an important role in the pathogenesis of SLE. MSCT appears beneficial effects in patients with SLE refractory to conventional treatments. miRNAs may participate in the regulation of proliferation, differentiation and immune regulation function of stem cells. The expression imbalance of miRNAs can cause cell dysfunction, which participates in a variety of SLE development and may be a new target for the treatment of SLE. Our preliminary data shows that abnormal expression of miRNAs in SLE MSCs. In which the expression of miR-744 is significantly increased with the expression of TGF-β in MSCs is significantly lower than normal. Studies have shown that miR-744 can negatively regulate TGF-β. The aim of this study is to investigate whether miR-744 can modulate MSCs by directly down-regulating TGF-β and its exact mechanism, to determine the role of miR-744 in allogeneic MSCs transplantation in SLE, to explore the possible pathogenesis of SLE and looking for more effective targets for clinical treatment, by in vitro and in vivo examination.

本课题组前期研究发现，SLE患者骨髓MSCs存在异常；异基因正常MSCs移植治疗难治性SLE疗效显著且安全。miRNAs可参与调控干细胞增殖、分化及免疫调节功能等，其表达及功能失调与SLE相关，可能成为SLE治疗新靶点。我们前期发现SLE MSCs中miRNAs表达谱与正常相比存在多种异常，其中miR-744表达显著升高。而SLE患者MSCs分泌TGF-β明显低于正常人。目前已有研究表明，miR-744可负向调控TGF-β。本研究拟通过体外试验及狼疮鼠体内移植MSCs，深入探讨miR-744能否通过下调TGF-β发挥其对MSCs的调控作用及其作用机制，阐明miR-744在异基因MSCs移植治疗SLE中的作用，探讨SLE可能的发病机制，寻求更有效的疾病干预新靶点，为临床应用MSCs治疗SLE及其他自身免疫病提供理论依据。

背景：抗黑色素瘤相关蛋白抗体（MDA5）阳性皮肌炎（DM）合并间质性肺病（ILD）预后不良。研究表明，同时注射IL-2和IL-18可以导致急性 ILD。抗MDA5阳性DM-ILD患者血清IL-18显著高于其他类型DM患者，因此我们认为，IL-2和IL-18诱导的ILD模型能更好地模拟抗MDA5阳性DM-ILD 的发病过程。研究表明，在肺纤维化小鼠中，ILC2细胞增多，ILC2可分泌双调蛋白（AREG），AREG-表皮生长因子受体（EGFR）通路激活可促进肺纤维化的发生，因此，ILC2细胞-AREG-EGFR信号通路可能参与ILD的发病，其具体调节机制如何有待于进一步研究。.结果：①经IL-2和IL-18处理组小鼠有较典型的肺泡损伤，相邻肺泡相互融合，肺泡壁增厚，肺间质内有较多的炎性细胞浸润；IFN-γ的含量在小鼠血清和BALF中都有所升高，TNF-α的含量在BALF中升高；②肺脏IHC结果显示正常上皮细胞和间质细胞中也可产生少量AREG，在由炎症因子介导的ILD中，间质内ILC2细胞增多，AREG的表达也明显增多，且随着疾病的发展而不断增加；③模型鼠疾病早期在MLN中ILC2细胞的比例显著增加，Th2细胞和Th17细胞的比例没有明显变化，后期ILC2细胞和Th17细胞的比例都没有变化，Th2细胞的比例下降；在肺组织中，ILC2细胞比例在早期增加而在后期减少，Th2细胞和Th17细胞的比例都没有变化；④利用西妥昔单抗对处于ILD不同阶段的小鼠进行1次或2次处理，药物处理组中IFN-γ和IL-25的水平增加。实验早期血清中AREG水平没有变化，而肺组织中AREG水平在药物处理组中降低；实验后期，药物处理组中血清IFN-γ水平降低，药物处理组和未处理组血清中IL-25、TGF-β和AREG水平没有明显变化。肺脏HE染色提示药物处理组和未处理组中肺部浸润和纤维化状态似乎同样严重。实验早期药物处理组MLN中ILC2细胞比例与未处理组相比显著降低，实验后期，药物处理组小鼠MLN及肺组织中未观察到ILC2细胞比例变化；⑤无论西妥昔单抗治疗与否，AKT的表达水平在实验早期均高于对照组，而磷酸化AKT表达水平明显下降，但药物处理组与未处理组无差异。实验后期，AKT和磷酸化AKT在药物处理组和未处理组的表达水平相似。但模型鼠的AKT表达水平明显高于对照组。