C型凝集素受体DC-SIGN在特应性皮炎免疫异常中的作用和分子机制

天然免疫功能异常是引发特应性皮炎（AD）的前提。作为重要的模式识别受体，DC-SIGN通过识别抗原表面的多糖结构活化免疫细胞。申请者及课题组研究发现，树突状细胞（DC）表面DC-SIGN的表达水平与AD疾病活动性相关；SIGNR1（DC-SIGN同源性受体）参与严重食物过敏小鼠的口服耐受；DC-SIGN还参与户尘螨介导的DC活化和前炎症因子的产生。.AD患者常见的易感病原菌和过敏原均富含多糖结构，但它们如何通过DC-SIGN引发免疫反应的机制尚不清楚。本课题拟进行AD患者DC细胞表面DC-SIGN表达、多糖抗原诱导DC活化和前炎症因子产生、指导初始T细胞活化及T型别分化，和初步进行DC-SIGN介导的细胞内信号转导通路的系列研究。试图证实DC-SIGN在AD免疫功能异常中所发挥的作用及分子机制，以期为AD发病机制的研究提供新的切入点。检索已发表文献，未见AD此方面的研究报道。

特应性皮炎（atopic dermatitis，AD）是一种具有代表性的过敏性疾病。在过去的三十年间，该病的发病率快速攀升。天然免疫功能异常是引发AD发病的前提和基础。作为重要的天然免疫受体，C型凝集素受体（C-type lectin receptors, CLRs）通过识别病原体或过敏原表面的“糖指纹”，来传递外源信号和活化免疫细胞。很多AD患者易感过敏原都富含多糖结构，但是目前尚不清楚它们具体是如何通过DC-SIGN而活化DC、从而诱导特定型别T细胞免疫反应的。为此，本研究拟深入探讨DC-SIGN在AD患者免疫功能异常中所发挥的功能作用机制。.为此，本课题围绕着以上问题进行了以下的系统研究：①检测不同严重度AD患者皮损区树突状细胞上DC-SIGN表达情况的研究，并分析其与疾病的相关性：在本部分实验中采用激光共聚焦和流式细胞技术进行了健康对照者、轻中度AD患者、重度AD患者皮损内CD11c+细胞上DC-SIGN表达量分析，并将DC-SIGN的表达量与疾病的严重度进行了相关性分析，发现皮损内CD11c+DC细胞上DC-SIGN的表达量随着病情的加重而增加。②DC-SIGN与过敏原结合能力的研究：首先采用ELISA方法进行了体外DC-SIGN-Fc与数种AD常见过敏原（树木花粉、草花粉、猫毛、狗毛、尘螨、鸡蛋白等）的结合能力研究，发现随着过敏原浓度的递增，过敏原与DC-SIGN-Fc的体外结合能力逐渐增强；然后构建了细胞表达DC-SIGN模型，将含有DC-SIGN基因序列的质粒转染进HEK293T细胞，获得瞬时表达后，利用激光共聚焦技术和流式细胞技术检测了细胞表达DC-SIGN与尘螨抗原和鸡蛋白抗原的结合情况研究，发现当过敏原与转染了DC-SIGN的293T细胞孵育3小时后，细胞表达的DC-SIGN可以有效摄取过敏原，并介导内吞入细胞内。③过敏原通过DC-SIGN活化DCs后诱导的前炎症细胞因子产生状况及对初始T细胞型别分化的影响：在进行过敏原刺激前，先将实验组分为抗MyD88抗体和/或DC-SIGN封闭抗体预处理组和不处理组，然后将尘螨和鸡蛋白抗原与AD患者MoDCs细胞共培养，采用ELISA方法检测上清液中的IL-10、IL-12、IL-6和TNF-a的分泌水平，同时进行细胞表面CD80、CD86、HLA-DR等的表达，以明确过敏原经DC-SIGN通路对DC细胞活