C型凝集素受体Langerin介导变应原多糖抗原免疫应答及其在特应性皮炎经皮致敏中的作用机制研究

Epicutaneous sensitization(ES) is very common in atopic dermatitis(AD). Until now, the exact mechanisms are still unknown. As the important sentinel cell, Langerhans cells(LCs) play an key role in this process. Langerin is a typical C type lectin receptors expressed on LCs. Our previous studies showed that Langerin could bind with many kinds of allergens specifically, and Mannan could promote immature LCs moving out the skin explants culture to become mature. Contrast to healthy controls, Langerin expression levels of LCs was higher in AD patients. In view of these preliminary data, we speculate that Langerin may be involved in EC directly. In our experimental design, we will use LCs, skin explants culture and K5-rtTA/tetO-TSLP mice as the research objects to study the following aspects: ①Langerin expression levels of LCs in AD patients;②Binding ability between Langerin and some kind of allergens; ③The mechanisms of allergen recognition、presentation and T cell responses mediated by Langerin. Through the above series studies, we try to verify the real function of Langerin on mediation allergen immune response and EC of AD. After retrieve the published papers, we could not find any relevant reported studies .

特应性皮炎（AD）经皮致敏现象普遍存在，但其机制尚不清楚。作为表皮中的前哨细胞，朗格汉斯细胞（LCs）在此过程中发挥重要作用。Langerin是特异性表达于LCs上的C型凝集素受体。我们的前期研究显示，Langerin可与多种变应原(包括Mannan)特异性结合；Mannan多糖作用的体外皮片模型中，移出皮片的LCs数量和比率明显增加；与健康人比较，AD患者LCs上表达的Langerin水平增高。故推测Langerin在介导变应原经皮致敏过程中扮演重要角色。 本课题拟以LCs、皮片培养系统、Langerin-AD小鼠为研究对象，进行AD患者LCs表面Langerin表达、Langerin与多种变应原结合能力、Langerin介导变应原识别、递呈和诱导下游免疫反应和分子机制研究。试图证实Langerin在介导变应原免疫应答及在AD经皮致敏中的作用。检索已发表文献，未见AD此方面的研究报道。

特应性皮炎（AD）经皮致敏现象普遍存在，但其机制尚不清楚。作为皮肤免疫屏障的前哨细胞，朗格汉斯细胞（LCs）在此过程中发挥重要作用。Langerin是特异性表达于LC上的C型凝集素受体，可特异性识别多种富含多糖结构的变应原，故推测Langerin在介导变应原经皮致敏中扮演核心角色。因此，深入研究Langerin在多糖抗原摄取、递呈和诱导T细胞免疫反应中的作用机制，以及在AD中变应原是如何通过Langerin介导LCs的活化，从而影响下游免疫反应方向具有重要意义。.为此，本课题围绕以上问题进行了以下研究：首先，基于ELISA技术进行Langerin与变应原多糖抗原体外结合能力的研究，发现变应原与Langerin的结合呈浓度依赖性；与此同时，成功构建了表达Langerin-HEK293T细胞模型，并利用激光共聚焦和流式细胞技术检测了Langerin与户尘螨抗原Der p2、鸡蛋白抗原OVA等的结合情况，发现细胞表达的Langerin可有效摄取多糖抗原，并介导其内吞入细胞内。接下来利用免疫组化和激光共聚焦技术进行AD患者皮损区LCs数量与Langerin表达情况的分析，发现Langerin+LCs数量在AD组和健康对照组并无显著差异。在此基础上，从人皮肤获取了原位LCs，同时从脐血CD34+细胞衍生获得LCs，鉴定了两种LCs表型，发现了诱导过程中出现具有不同表型特征及活化成熟状态的不同LC亚群；同时进行了Der p2抗原的体外结合与刺激实验，进一步证实Langerin可特异性识别摄取Der p2，不同来源LCs及不同LC亚群对Der p2的摄取和刺激反应有所不同。最后，利用Langerin-/-小鼠进行OVA抗原通过Langerin途径经皮致敏后临床症状和体征评分、组织学变化、血清相关炎症因子及局部引流淋巴结炎症细胞检测，发现Langerin在一定程度上可降低皮肤炎症细胞浸润程度，参与并影响变应原抗原的经皮致敏过程。综上，本项目在细胞水平、体外模型和动物水平等多个层次明确了Langerin在介导多糖抗原摄取和递呈，以及在AD经皮致敏而致免疫功能异常中所发挥的功能作用机制，也为开辟过敏性疾病发病机制研究的新领域和发展新的治疗策略提供了理论和实验基础。