Slit2及受体Robo4调控血管顶端细胞分枝在角膜血管新生中的作用

新生血管是大多角膜疾病过程中的重要病理改变，其可破坏角膜免疫赦免、继发角膜混浊而严重影响视力甚至致盲。目前新生血管机制尤其血管分枝机制未完全清楚。血管与神经系统具有相似的分枝网络结构，这两个系统可能受相同的信号分子调控。已知调控神经网络形成的轴突导向因子有四个家族。我们前期的研究发现Netrin1和EphrinB2对血管新生的分枝形成具有调控作用，但呈双向性而不利于作为治疗血管新生的靶向基因。本课题定位于单向调控作用的Slit/Robo家族。我们拟建立活体内外三维血管新生模型，定量分析轴突导向因子Slit2及其血管特异性受体Robo4对血管内皮迁移、顶端细胞分枝形成和血管分枝导航影响；并对Robo4受体进行体内外的靶向干扰，从全新的角度全面分析角膜血管新生过程；同时采用蛋白质组学技术研究Slit/Robo下游信号转导通路。本课题对于了解角膜血管新生过程，寻求新的防治途径提供理论和实践基础。

新生血管是大多角膜疾病过程中的重要病理改变，其可破坏角膜免疫赦免、继发角膜混浊而严重影响视力甚至致盲。目前新生血管机制尤其血管分枝机制未完全清楚。血管与神经系统具有相似的分枝网络结构，这两个系统可能受相同的信号分子调控。已知调控神经网络形成的轴突导向因子有四个家族。我们前期的研究发现Netrin1和EphrinB2对血管新生的分枝形成具有调控作用，但呈双向性而不利于作为治疗血管新生的靶向基因。本课题定位于单向调控作用的Slit/Robo家族。我们完成了角膜新生血管形成的动物模型制备，分析了Slit2及Robo受体在角膜的定量、定位表达，成功构建轴突导向因子Slit2的表达载体并获得纯化Slit2蛋白，研究了Slit2蛋白体外修饰血管内皮细胞对血管新生的作用。构建微载体三维血管新生模型并分析Slit2蛋白对体外血管新生微观形态学影响。完成了靶向Robo1、Robo4的siRNA表达载体的构建，阳离子膜融合脂质体(CFL)及复合物的制备，并研究了CFL复合物体外转染效率以及体外靶向干扰Robo1、Robo4对血管新生的作用。同时观察了体内RNA干扰Robo对角膜新生血管形成的作用。从全新的角度全面分析角膜血管新生过程。本课题对于了解角膜血管新生过程，寻求新的防治途径提供理论和实践基础。