SphK1通路对二次打击脓毒症模型淋巴细胞凋亡的影响及其机制研究

目前脓毒症缺乏有效治疗手段。早期防止过度炎症反应和在免疫麻痹期维持宿主免疫功能是当前治疗的两个关键环节。我们的预实验发现脓毒症患者中性粒细胞和单核细胞SphK1表达明显增加。最新的研究表明阻断鞘氨醇激酶-1(SphK1)通路可抑制脓毒症促炎因子表达，改善脓毒症预后。阻断SphK1可加速肿瘤细胞凋亡，但对脓毒症淋巴细胞凋亡的影响研究甚少。本课题拟首先着眼于观察临床脓毒症患者中性粒细胞和单核细胞SphK1的表达与脓症毒严重程度及预后的相关性，再利用临床相关二次打击脓毒症模型，使用SphK1特异性抗体和siRNA技术在体阻断小鼠SphK1的表达，研究SphK1通路与脓毒症预后的相关性及其对二次打击脓毒症小鼠存活率、淋巴细胞凋亡的影响，探讨可能的作用机制，并研究可能的对策（如使用前期研究阻断负性共刺激分子以减少淋巴细胞凋亡的策略），为SphK1通路成为脓毒症治疗的新靶点寻求理论依据。

脓毒症免疫麻痹是脓毒症高死亡率的重要病理机制，但治疗手段缺乏。在本项目的资助下，我们发现Sphk1在脓毒症免疫麻痹中发挥重要作用。Sphk1在重症脓毒症免疫麻痹病人淋巴细胞中高表达，在“二次打击”脓毒症免疫麻痹模型上，干扰Sphk1表达能有效提高动物存活率，增强动物抗病原微生物能力，表明Sphk1可能是干预免疫麻痹的重要蛋白质。进一步研究发现Sphk1能激活淋巴细胞Src激酶活性，Src磷酸化STAT1，转位进核后诱导淋巴细胞死亡受体Fas(APO-1)表达，促进淋巴细胞凋亡，加重免疫麻痹。鉴于Sphk1在免疫麻痹中的重要性，建立多针对Sphk1活性药物筛选体系，发现强心甾类化合物如哇巴因具有明显的抑制淋巴细胞Sphk1活性，进一步研究发现哇巴因能在转录后水平精密调控TH1细胞因子稳定性，包括TNF-α,IFN-γ,GM-CSF,实现在免疫麻痹状态下对TH1细胞因子表达的重新编程，进而逆转免疫麻痹，这是首次发现的具有逆转脓毒症免疫麻痹的小分子化合物。在这些研究工作基础上，我们还发现在免疫麻痹病人单核细胞中，Sphk1表达与另外一种TLR通路负调控蛋白IRAK-M的表达呈正相关，从而探索IRAK-M参与脓毒症免疫麻痹的作用机制，研究IRAK-M的表达调控机制，目前这部分研究尚在进行中。综上所述，本研究围绕脓毒症免疫麻痹，发现Sphk1、IRAK-M在该疾病中的重要病理机制，并发现能够干预免疫麻痹的小分子化合物。上述研究结果在EMBO mol med, cell death & Dis, Mol Cell Bio等SCI期刊上发表论文4篇，获得2项授权专利，发表2篇中文核心期刊，培养硕士研究生2名，尚有多篇论文正在投稿阶段。