护卵汤动员血管内皮祖细胞对薄型子宫内膜大鼠模型影响的实验研究

Thin endometrium is refers to the endometrial thickness below the access to the threshold of thickness of the pregnancy,the serious influence women's fertility.Endometrial has strong regeneration ability and the angiogenesis is a necessary condition for the growth of the endometrium.Our previous studies focused on Huluantang through the way such as paracrine regulation and stregthen the ovarian function involved in the improvement and the recrptivity of endometrium.Because of angiogenesis and endothelial progenitor cells(EPCs) is directly related to,this study proposed on the basis of previous studies,by establishing the rat model with uterine thin,by BrdU in vitro labeling of EPCs in tracer method,from the perspective of stem cells mobilization combined with traditional Chinese medicine intervention,by immunohistochemicall methods such as protein,western blot and RT-PCR detection and the receptivity of endometrium marker protein,vascular endothelial cell marker protein and gene expression of cytokines,about whether or not to Huluantang can effectively mobilize bone marrow sources of endothelial progenitor cells in peripheral blood and endometrial homing to ischemia,which affects endometrial vascular repair and regeneration.Further research to Huluantang targets to improve the receptivity of endometrium,expectations for the clinical treatment of thin endometrium to provide scientific and objective experimental basis,for the prevention and treatment of endometrial lesions disease to explore new methods.

薄型子宫内薄型子宫内膜是指子宫内膜厚度低于能够获得妊娠的阈厚度，其严重影响女性的生育能力。子宫内膜具有极强的再生能力，而血管生成是子宫内膜生长的一个必要条件。我们前期研究集中在护卵汤通过旁分泌调节和增强卵巢功能等途径参与到改善子宫内膜容受性中来。由于血管生成与血管内皮祖细胞（EPCs）直接相关，本研究拟在前期研究的基础上，通过建立薄型子宫大鼠模型，采用BrdU体外标记对EPCs进行体内示踪的方法，从干细胞动员角度结合中药干预，通过免疫组化、蛋白免疫印迹及RT-PCR等方法检测子宫内膜容受性标志蛋白、血管内皮细胞标志蛋白及细胞因子的基因表达，探讨护卵汤是否可以有效动员骨髓来源的血管内皮祖细胞进入外周血并向缺血子宫内膜归巢，从而影响子宫内膜血管修复及再生。进一步研究护卵汤改善子宫内膜容受性的作用靶点，期望为其临床治疗薄型子宫内膜提供科学客观的实验依据，为子宫内膜损伤性疾病的预防和治疗探索新方法

拟尤昭玲教授经验方护卵汤动员血管内皮祖细胞对薄型子宫内膜具有极强的再生能力。本课题通过建立薄型子宫大鼠模型，从造模组大鼠子宫内膜生长受限的形态学特点，上皮细胞、间质中细胞生长受限的特点，VEGF表达量降低提示造模成功。采用BrdU体外标记对EPCs进行体内示踪的方法，从干细胞动员角度结合中药干预，通过HE染色观察子宫内膜形态学以及测定内膜厚度；免疫组化检测子宫内膜BrdU的表达；免疫组化及蛋白免疫印迹方法检测子宫内膜间质细胞，上皮细胞，子宫内膜容受性标志蛋白整合素αγβ3、LIF的表达及血管内皮细胞标志蛋白，即波形蛋白（vimintin），角蛋白(vwf)，CD34的表达情况；RT-PCR检测VEGF，bFGF，TNF-α，IL-1β，IL-6mRNA的表达。应用酶联免疫法测定血清中血管内皮生长因子（VEGF）、基质细胞源性因子-1（SDF-1），粒/巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和促红细胞生成素（EPO）的含量，硝酸还原法检测一氧化氮（NO）含量。分离、培养和鉴定各组大鼠骨髓内皮祖细胞，进行免疫细胞化学鉴定内皮标志VEGFR-2和vWF。利用透射电镜、MTT比色法、Boyden小室、粘附能力测定实验和导致荧光显微镜来观察药物对细胞结构、增值能力、吞噬Dil-acLDL能力、迁移能力、粘附能力和体外形成血管的能力的影响。结果显示护卵汤能有效动员骨髓来源的血管内皮祖细胞进入外周血并向缺血子宫内膜归巢，从而影响子宫内膜血管修复及再生综上所述，本研究为探讨中药治疗子宫内膜损伤性疾病的机制奠定了坚实的工作基础。项目资助发表核心论文6篇，待发表2篇，其中一篇为SCI论文。培养硕士生2名，均已经取得硕士学位，其研究内容及毕业论文均与本研究直接密切相关。项目投入经费220800元，支出 166568.79元，各项支出基本与预算相符。剩余经费54231.21元，剩余经费计划用于本项目研究后续支出。