从ERS信号通路探讨慢性心理应激影响T2DM大鼠IR及逍遥散的干预机制

hronic psychological stress can result in T2DM, Cardiovascular Disease, neu- ropsychosis. Insulin resistance (IR) is the first important reason of T2DM. It is important restraining IR to cure T2DM and its complication. ERS is the key mechanism of the IR taking form.Psychological stress affects IR by activating ERS. This study is base on the early research, comparing on chronic psychological stress with seven emotions causes of disease of TCM. According to the theory of TCM “Internal impairment due to seven emotions, first impairs liver”. We pose the hypothesis—“normal carbohydrate and grease metabolism of body reflect the coordination in dredging and regulating of the liver and transportation and transformation of the spleen. IR is for the liver fails to dredge and disperse and invades the spleen”. Spontaneous T2DM mice act as research object, adopt chronic psychological stress model and modern molecular biotechnology, study chronic psychological stress affecting IR of T2DM and the mechanism of xiaoyaosan intervene in it from the signal pathway of ERS. The study will provide in new train of thought and foundation of test for T2DM and diseases relation to IR being treated with TCM, and develop the theory of pathogenesis of TCM.

慢性心理应激是2型糖尿病、心脑血管疾病及神经精神疾病等心身疾病的诱发因素。胰岛素抵抗（IR）是2型糖尿病及其并发症的重要始发因素，控制IR对于2型糖尿病及并发症的防治至关重要。在IR的形成过程中，内质网应激（ERS）是关键的环节，慢性心理应激通过激活ERS，诱发IR的形成或加快IR的发展。本课题在前期研究的基础上，根据中医“情志病因，多先伤肝”的理论，提出“机体正常糖脂代谢是中医肝脾疏运功能协调的微观体现，IR的形成是中医肝脾疏运失调的结果”的假说。并进一步以自发性2型糖尿病大鼠为研究对象，结合慢性心理应激造模方法，采用现代分子生物学实验技术、体外细胞培养结合血清药理学方法，从ERS信号通路探讨慢性心理应激因素对2型糖尿病大鼠IR发生的影响及中药复方逍遥散的作用效果及相关机制。为2型糖尿病及与IR相关疾病的中医药防治，同时也为丰富和发展中医病因病机理论提供新的思路及实验依据。

目的：慢性应激是T2DM重要诱因，IR是T2DM的主要发病机制之一。本研究从T2DM的中医病因学角度，提出糖尿病的基本病机是肝郁脾虚是糖尿病发展的基本病机的假说。从动物在体实验及离体细胞实验，采用病理学、分子生物学等现代实验技术，从糖代谢及相关基因变化探讨心理应激影响T2DM小鼠IR的机理及中药复方加减逍遥散的作用机制，为中医药防治糖尿病探索新的途径。.方法：动物在体实验分别采用高糖高脂kk小鼠、及高糖高脂SD大鼠（腹腔注射STZ）等两种T2DM小鼠模型，及慢性多相性应激模型；采用高糖培养基与CORT建立离体细胞T2DM模型；试纸法检测血糖、酶联免疫法检测糖化血红蛋白、血脂、PCR芯片检测89个T2DM相关基因表达、免疫组化法及Western-blot检测相关蛋白表达。 .结果：动物在体实验结果发现，慢性应激刺激能明显升高两种T2DM模型鼠的FBG、HbA1c、TG、TCHO；明显降低其BW、HDL-C及ISI，而加减逍遥散能逆转慢性应激所致的FBG、TG、TCHO、LDL-C、HDL-C、HbA1c 及ISI的变化，在基因表达方面慢性应激可使89个基因中的7个基因表达上调； 6个下调；逍遥散可使37个基因表达上调；6个下调的基因表达下调。蛋白表达方面，慢性应激可导致T2DM模型鼠胰腺、肝脏及肌肉等组织中的GR、IRS-1表达增强，而加减逍遥散能降低慢性应激状态下T2DM模型鼠GR与IRS-1的表达。离体细胞培养实验结果发现，CORT能诱导高糖环境下胰岛细胞凋亡，高糖、皮质酮及加减逍遥散都是促进INS的分泌的因素，高糖能下调ATF6与IRE1mRNA、Caspase-12及CHOP蛋白的表达，而皮质酮能上调高糖环境下ATF6、IRE1mRNA、Caspase-12及CHOP的表达，加减逍遥散能逆转因皮质酮诱导的IRE1mRNA及Caspase-12的表达变化。.结论：慢性心理应激能加重T2DM模型鼠，降低其胰岛素的敏感性，升高其血清中的TG、CHO，降低HDL-C，使模型鼠的体重减轻；加味逍遥散不仅对单纯T2DM有较好的疗效，而且能缓解慢性应激状态下T2DM模型鼠的血糖升高，胰岛素的敏感性降低的状况，降低模型鼠血清中的TG、CHO、LDL-C，升高HDL-C，其作用机制可能是通过对多种T2DM相关基因与蛋白表达的调控，提高胰岛素的敏感性从而纠正了模型鼠糖脂代谢的紊乱