电针对氯胺酮麻醉发育期大鼠促醒及脑保护机制研究

Early childhood anesthetic exposure is quite seriously existed in our country, more and more evidence show that many times and longer exposure to anesthetic drugs during the brain’s growth spurt will lead to many damage to the brain including learning and memory ,movement control disorder. Reducing infant anesthetic usage, anesthesia duration and the protection of brain function is the key points. Waking the brain and promoting the information flow in the brain are both the two main function by the electroacupuncture. Usage of the electroacupuncture in the late children anesthesia maybe will promote the waking and prevente the damage of brain . The thalamus is the key target of anesthetic drugs and promoting acupunctre . So the acupuncture maybe can be used to promote the brain from anesthesia to awake and protect the brain. Ketamine anesthesia will adopted for several times ,and electroacupuncture will be used in the late phase to wake up the rats each time. The Morris maze test and hippocampal LTP test will be adopted to prove the protection of electroacupuncture indirectly. The hippocampal neurogenesis and neuronal death will be tested in order to prove the protection of electroacupuncture directly. The thalamus neuron activated will be tested in the chronic experiments. And the electroacupuncture effects to the field potential will be recorded after the thalamus activity inhibited in the acute experiment. Combination of the both two expeirments will prove that thalamus is the key structure in the brain mediated the acupuncture effects. The electroacupuncture maybe can wake up the brain from anesthesia and protect the brain from anesthesia damage.The ascending information from thalamus to the cortex including hippocampus activated by electroacupuncture maybe is the important mechanism.

幼儿早期麻药暴露情况在我国相当严重，越来越多证据显示脑急剧发育期多次较长时间暴露于麻药会导致包括学习记忆、运动调控等在内的远期脑功能损伤。减少幼儿麻药使用量、减少麻醉持续时间，保护脑功能是关键。针刺具有醒脑开窍、激活脑内正常信息流保护大脑的功能，在幼儿麻醉后期使用电针可能具有促醒、预防脑功能损害的功能。丘脑是全麻药物以及醒脑开窍针刺发挥作用的一关键靶点，因此针刺可能具有对麻醉促醒及保护作用。本项目采用氯胺酮反复多次麻醉新生大鼠后采用电针促醒，以Morris水迷宫、海马长时程增强检测其学习记忆能力以此间接反映电针的保护作用，以及检测海马神经发生、神经死亡直接反映保护作用。在此慢性实验后检测丘脑神经元激活情况以及在急性实验中直接抑制丘脑后观察电针对场电的效果，急慢性实验结合验证丘脑的重要作用。电针激活丘脑上传信息至包括海马在内的皮层大脑可能是其对发育期大脑发挥促醒以及脑保护作用的重要机制。

幼儿早期麻药反复暴露会导致包括学习记忆、运动调控等在内的远期脑功能损伤。针刺具有醒脑开窍、双向调节等保护大脑的功能，在幼儿麻醉后期使用电针可能具有促醒、预防脑功能损害的功能。.本项目采用新生大白鼠幼鼠在发育关键期反复进行麻醉后电针干预促醒，并检测各项学习记忆相关指标，初步探讨了电针干预可能改善远期学习记忆能力机制。.实验主要分为生理盐水组（正常组）、麻醉组、麻醉加电针组、麻醉加留针组。具体实施方案为幼鼠出生后第7天、14天、21天进行氯胺酮全麻，维持5小时，在第四小时末开始电针促醒。在电针完成后，开始统计每组幼鼠苏醒的百分比。后期检测各组的空间学习记忆相关行为学检测(Morris水迷宫），及突触效能、可塑性LTP的检测。另有一部分检测了海马区细胞凋亡和细胞发生情况。.结果如下：.1）体重检测各组无明显差异（one way ANOVA, P=0.9825），显示麻醉于生长发育无影响。.2）实验数据显示麻醉组幼鼠全麻后苏醒时间较留针及电针组长(upaired t-test, P<0.0001)，此说明针灸确有促醒作用。.3）氯胺酮多次麻醉组在海马高度相关的空间学习记忆能力明显受损(逃避潜伏期学习曲线偏离正常、定位导航表现差)，表现出突触效能下降（突触输入输出曲线IO斜率低）、长期可塑性（LTP）能力下降。丘脑激活增加(c-fos DNA含量增加)，海马区细胞凋亡增加（麻醉组与正常组比较，凋亡caspase3DNA检测（unpaired t-test,P=0.01）和凋亡原位杂交检测(unpaired t-test, P=0.0003)，而干细胞数目、突触数目、神经元分化等尚无明显差异。此表明在多次氯胺酮麻醉后幼鼠大脑可能活动过度，神经凋亡增加。此可能是其学习记忆相关脑功能下降的重要原因。.4）电针及留针均能改善反复麻醉幼鼠学习记忆损伤能力（与麻醉组比较，逃避潜伏期显示学习曲线明显改善，LTP增强明显（t-test, P<0.0001)，IO曲线斜率明显较高），并能下调丘脑过度活动及神经凋亡(unpaired t-test, P=0.0003)。针灸对脑功能具有双向调节作用，在此处后期作用可能是对脑过度活动的负性调节作用。.结论：对反复麻醉幼鼠，电针具备促醒作用，并对远期学习记忆能力有明显改善作用，其机制可能是通过抑制不正常脑活动，抑制神经细胞凋亡，改善突触功能实现。