电针“水沟-尾尖”穴对全麻麻醉动物Orexin系统的影响及其促醒机制研究

This study was aimed to the analeptic effect and mechanism of Electroacupuncture at Shuigou -Weijian on traditional Chinese veterinary clinic. In this study, we use SPF New Zealand rabbits as target animals , use Xylazine hydrochloride injection to creat general anesthesia and electroacupunc at Shuigou- Weijian. On the basis of observing the effect of electroacupuncture, the concentration changes of Orexin-A、Orexin-B、OX1R、OX2R in cerebral cortex、cerebellum、hippocampus、brainstem and thalamus before and after the treatment will be assayed by ELISA and WesternBlot. Distribution and the RNA expression of Orexin A、Orexin B、OX1R and OX2R in cerebral cortex、cerebellum、hippocampus、brainstem and thalamus before and after the treatment will be compared by IHC and RT-PCR. The concentration changes of Orexin-A、Orexin-B in blood plasma are also detected before and after treatment by ELISA. Therefore, the analeptic mechanism of Electroacupuncture at Shuigou –Weijian was discussed in general anesthesia rabbits through orexin arousal system. Modern scientific explanation and experimental basis were provided for Chinese veterinary acupuncture theory and method.

本研究针对中兽医临床上的电针疗法，探索电针疗法促醒的作用机制。本研究用SPF新西兰兔作为动物范例，采用速眠新全身麻醉，对兔水沟穴和尾尖穴进行电针试验，在观察电针促醒作用的基础上，用ELISA法和WesternBlot法检测电针处理后麻醉兔大脑皮层、小脑、海马、脑干和丘脑中Orexin-A、Orexin-B、OX1R、OX2R蛋白的含量随时间变化情况，用IHC法、RT-PCR法检测电针处理后麻醉兔大脑皮层、小脑、海马、脑干和丘脑中Orexin-A、Orexin-B、OX1R、OX2R的分布和基因表达量随时间变化情况；用ELISA法检测电针处理后麻醉兔外周血中Orexin-A、Orexin-B蛋白含量随时间变化情况；从Orexin系统通路探讨电针“水沟-尾尖”穴对兔全身麻醉的促醒机理，为中兽医针灸理论和方法提供现代科学解释和试验基础。

本项目通过电针“水沟-尾尖”穴对速眠新麻醉兔的促醒研究，筛选获得对麻醉后促醒具有良好效果的电针“水沟-尾尖”穴最佳促醒参数，并对促醒过程中麻醉兔的各脑区的Orexin觉醒系统蛋白Orexin-A、Orexin-B及其受体OX1R、OX2R的蛋白含量和分布，以及相对基因表达量变化等进行检测观察，发现电针“水沟-尾尖”穴对速眠新麻醉兔促醒时提高海马区内Orexin受体的表达，显著降低大脑皮层和丘脑中的Orexin蛋白前体PreprOrexin mRNA的表达，同时提高各脑区组织中Orexin蛋白受体的含量来提高Orexin觉醒蛋白的效率来促进苏醒的，同时小脑和脑干组织的的Orexin系统蛋白差异不明显，提示电针“水沟-尾尖”促醒速眠新全麻麻醉兔的促醒效果除了提高Orexin觉醒系统的促醒效率外，可能还有更加复杂的机制。此外，本项目通过电针“水沟-尾尖”穴对速眠新麻醉兔的促醒研究，获得对麻醉后促醒具有良好效果的电针参数组合，并具有潜在的在临床休克、昏迷等意识障碍疾病方面具有应用价值。同时本项目通过电针“水沟-尾尖”穴促醒对HPA轴、HPT轴的影响、电针“水沟-耳尖”穴促醒参数筛选、犬腹部手术电针镇痛、电针镇痛的系统评价等初步探索研究，为今后中兽医针灸研究发现了进一步潜在研究点。