交配活动对三疣梭子蟹卵巢发育的影响

采用单个体筐养模式养殖三疣梭子蟹以控制个体间的接触，在相同养殖条件下进行养殖，通过全人工定向交配以获得三疣梭子蟹雌性交配与未交配个体。分别在解剖学水平、组织学水平、基因转录水平和蛋白表达水平进行研究，以明确三疣梭子蟹卵巢的发育是否受交配的影响。通过解剖学观察梭子蟹卵巢发育程度，确定卵巢发育分期，测定三疣梭子蟹卵巢重与体重，计算卵巢指数，在组织学水平解析交配对三疣梭子蟹卵巢发育的影响；采用常规组织切片技术研究卵巢变化，在组织学水平解析交配对卵巢发育的影响；应用基因表达谱技术研究三疣梭子蟹卵巢基因表达的差异，在转录水平解析交配对三疣梭子蟹卵巢发育影响；通过差异蛋白组学研究受交配影响相关蛋白，从蛋白表达水平明确交配对三疣梭子蟹卵巢发育的影响。从不同水平研究交配对卵巢发育的影响，不仅有助于阐明交配是否是三疣梭子蟹卵巢正常发育的必需环节，还能丰富甲壳动物繁育生物学基本理论。

本项目从个体和解剖学水平上比较了交配与未交配三疣梭子蟹的差异，观察记录试验组和对照组卵巢颜色及形态，确定卵巢发育程度及分期；测量三疣梭子蟹卵巢重及体重，计算了卵巢指数，比较实验组与对照组卵巢指数的差异。利用卵巢为研究材料，构建了三疣梭子蟹卵巢差减文库，获得176条差异EST,交配卵巢中检测到100条表达下调，76条表达上调，测序检测后经NCBI Blast分析获得51个unigene，其中27个上调，24个下调；同时进行了表达谱测序，并根据测序结果，定制了表达谱芯片，获得差异基因2072条，其中表达上调基因715条，表达下调基因1357条，从转录水平揭示了交配对三疣梭子蟹卵巢发育的影响。以卵巢为研究材料，利用双向电泳技术获得差异蛋白并对所得差异蛋白进行质谱分析，获得106个差异蛋白点，在交配卵巢中有44个蛋白表达升高，73个蛋白表达下调。106个蛋白点中，96个人成功进行了质谱分析，获得28个从unique蛋白，其中20个表达下调，8个表达上调。从蛋白表达水平解析了交配对三疣梭子蟹卵巢发育的影响。项目发表研究论文7篇，其中4篇SCI收录；申请发明专利3项，其中2项获得授权。