基于抗氧化和促造血增殖研究鸡血藤及其活性成分群（JXT-TP50）双重造血调控作用的分子机制

The pharmacological action network of traditional Chinese medicine (TCM) and TCM recipe have notalbe characteristics, such as globality, synergistic effect with multicomponent and mutiple target points, which contribute to better therapeutic effect and minor side effect compared with chemicals. Based on previous works, this study pay attention on signal transduction pathway of Ras-MAPK-ERK, JAK-STAT and ROS-p16, use cytokine dependent cell line, mice with STAT5 mutation, C57BL/6L mice and advanced detective technologies, such as flow cytometer, Western blot and real-time RT-PCR, to investigate the mechanism of anti-oxidant effect and the stimulating-proliferation effect on hemotopoietic cells of Spatholobus suberectus Dunn and its active consititutents (JXT-TP50), in order to clarify the molecular mechanism of nourishing blood effect of Spatholobus suberectus Dunn and JXT-TP50 and explain the theory of "activating and nourishing blood" of traditional Chinese medicine, promote the modernization of TCM.

中药及其复方具有显著的整体性、多成分和多靶点协同作用的网络药理作用特点，与单靶点化学药物相比，可获得更好的临床疗效和较小的毒副作用。本项目拟在前期工作的基础上，针对鸡血藤及其活性成分群（JXT-TP50）促进造血干/祖细胞增殖、抗氧化的双重造血调控作用，聚焦于"Ras-MAPK-ERK 、JNK-STAT"信号转导途径、ROS-p16通路，采用细胞因子依赖细胞株、STAT5基因突变动物、辐射C57BL/6C小鼠等细胞、动物模型，借助流式细胞检测、Western blot、real-time RT-PCR 等先进技术，探讨鸡血藤及JXT-TP50促进造血细胞增殖的信号转导途径及抗氧化作用机制，以阐明鸡血藤及JXT-TP50"补血活血"、"生新血"的分子机制，从分子水平阐述祖国医学"补血活血"理论，促进中药现代化研究。

鸡血藤为豆科（Leguminosae）密花豆属（Spatholobus）植物密花豆（Spatholobus suberectus）的干燥藤茎，具有活血补血，调经止痛，舒经活络之功效。本项目聚焦于JAK-STAT信号转导途径，针对鸡血藤促造血、抗氧化的双重调控作用，采用细胞因子依赖细胞株以及辐射损伤小鼠模型，研究了鸡血藤醇提物、JXT-TP50及儿茶素对辐射损伤小鼠的保护作用，最终阐明鸡血藤及其活性成分多重造血调控机制。本课题研究发现：鸡血藤醇提物和儿茶素可显著改善辐射致亚急性损伤小鼠的状态和体重，加快外周血象的恢复速度，从Day7开始给药组与模型组之间的差异逐渐显著，胸腺和脾脏指数在Day7和Day28均显著高于模型组。辐射可使小鼠血清和肝脏的ROS和MDA含量升高，SOD和GSH-Px活力降低；从抗氧化的角度，我们的研究发现鸡血藤醇提物和儿茶素均能通过提高抗氧化酶SOD和GSH-Px活力，减少有害脂质过氧化物MDA生成，使ROS含量减少，发挥抗氧化作用，降低辐射损伤。从促进造血的角度，我们发现，鸡血藤醇提物和儿茶素可增加模型小鼠骨髓细胞数量，减轻骨髓损伤；促进骨髓造血祖细胞CFU-GM、BFU-E和CFU-Mix集落的形成；提高骨髓蛋白中JAK2、STAT5a和STAT5b的磷酸化水平，激活造血因子受体相关JAK-STAT信号通路，促进造血。体外实验表明，鸡血藤醇提物和儿茶素可促进G-CSF依赖的NFS-60细胞的增殖，其促增殖作用机制并不是增加细胞内G-CSF的含量，而是与提高G-CSF受体的表达，激活G-CSF受体信号转导通路有关。此外，鸡血藤醇提物和儿茶素可降低模型小鼠骨髓细胞的凋亡率，使小鼠骨髓中凋亡相关蛋白Bcl-2 表达上调，Cleaved Caspase-3和Bax的表达下调。综上，鸡血藤醇提物和儿茶素可以通过提高机体的抗氧化酶活力，降低辐射造成的ROS剧增，从而保护骨髓造血干/祖细胞，一方面提高其数量，改善造血微环境，另一方面调节凋亡相关蛋白的表达，减少骨髓细胞凋亡；此外，还通过增加JAK2和STAT5蛋白的磷酸化水平，激活造血因子相关JAK-STAT信号通路，促进造血，加速外周血象的恢复。因此，鸡血藤醇提物和儿茶素具有抗氧化和促造血双重调控机制，对亚急性辐射损伤小鼠有较好的保护作用。