新疆阿魏提取物在IL-22/MAPK信号通路调控银屑病KC增殖、分化中作用机制的研究

Psoriasis is a common chronic inflammatory skin disease with genes and environmence interaction, which lasted for a long time and easy to relapse. Many viewpoints were rasied in past twenty years, but the mechanism of the psoriasis remained unclear. At present, many treatments have bright out significant advrese e effects. Our previous study have suggest that the extract of sinkiang Ferula have the protective effect on the psoriasis vulgaris. At the present study, the PASI score, inflammatory cytokines and the change of the T lymphocyte subsets were detected by the experimental tests of molecular biology, which could throw light on the clue of the possible mechanism of the psoriasis vulgaris. Construction the plasmid of C/EBPα-siRNA and transfection into the KC cells, and then cultured the KC cell with the different concentrations of sinkiang Ferula extract, testing the relevant index of KC cell proliferation and differentiation to explore the latent mechanism of cell proliferation. Such as: the levels of inflamatory cytokines, the expression of protein of JNK、p-JNK、p38、p-p38、ERK、p-ERK、c-myc、E2F and C/EBPα. At last, by the animals model, the levels of inflammatory cytokines, PBMC, skin histopathological change and protein levels of MAPK sigal trasnduction pathway were detected to explore possible role of sinkiang Ferula extract in psoriasis vulgaris. The objective of this research will further enrich the mechanism sutdy of psoriasis vulgaris and helpful to utilization of the siakiang traditional medicine.

银屑病是一种常见的基因与环境相互作用的慢性炎症性皮肤病，发病机制不明且病程长，易复发，治疗困难，目前许多治疗方法有明显的副作用且患者医疗负担重。本研究是在前期实验提示新疆特色维药阿魏根外用制剂在寻常型银屑病、掌跖脓疱病及银屑病动物模型中有积极治疗效果的基础上，利用人群和整体动物实验通过评估不同时点皮损PASI评分、外周血淋巴细胞亚群数量、细胞因子水平及表皮增殖、分化的异常，探讨阿魏根提取物在银屑病中的治疗作用及其可能的作用机制；通过构建C/EBPα siRNA质粒转染至人KC细胞并与不同浓度的阿魏根提取物共培养，检测KC细胞增殖与分化相关指标的变化，MAPK信号通路及C/EBPα、c-Myc蛋白的表达，进一步探讨免疫功能紊乱导致KC过度增殖和异常分化的信号通路及阿魏根提取物发挥作用的可能靶点，为充分利用新疆特有的医药资源开发安全、有效、副作用小的阿魏提取物外用制剂及口服制剂提供理论基础。

银屑病是一种常见的基因与环境相互作用的慢性炎症性皮肤病，发病机制不明且病程长，易复发，治疗困难，目前许多治疗方法有明显的副作用且患者医疗负担重。本研究是在前期实验提示新疆特色维药阿魏根外用制剂在寻常型银屑病、掌跖脓疱病及银屑病动物模型中有积极治疗效果的基础上，研究新疆阿魏提取物在银屑病治疗中的保护作用及其可能的作用机制，为进一步充分利用地区民族医药资源，研发新型银屑病外用药物提供基础研究。本次研究主要阿魏根的主要成分阿魏酸和提取物（倍半萜香豆素类化合物）的抗增殖作用和可能的信号通路。主要研究内容如下：1. 探索体外细胞培养不同处理因素的药物浓度和培养时间：利用CCK8实验方法检测阿魏酸和阿魏根提取物对HaCat细胞的抑制率及氧化应激指标的变化确定适宜的培养浓度和时间；2. 分别利用细胞形态学观察、CCK8法及流式细胞技术研究阿魏酸及阿魏根提取物对细胞形态、细胞增殖及细胞周期的影响，探讨阿魏根粗提物中阿魏酸及倍半萜香豆素类化合物在银屑病治疗中的有效作用，明确倍半萜香豆素类化合物是抑制HaCat细胞增殖，发挥治疗作用的主要成分；3.利用RT-PCR及免疫印迹实验揭示了MAPK信号通路在阿魏根提取物促进角质形成细胞分化，抑制细胞增殖的作用机制，并且明确了C/EBP α并无明显作用的结果；4. 利用免疫荧光技术检测了NF-kB转录因子的活化和核转移，并且阿魏根提取物可以抑制转录因子的活化，并为进一步阐明其信号通路途径提供基础数据。为阿魏根提取物的临床药用价值研究奠定了基础，在此过程中也阐明了阿魏根提取物的作用靶点，为开拓银屑病新的治疗方案及利用作用靶点研发相关的靶向药物也有重要的理论价值。