靶向性金纳米粒子修饰的腺相关病毒载体的研制及肿瘤靶向治疗研究

针对长期以来基因靶向治疗的需要，借助于金纳米粒子比表面积大、链接或携带的功能基团多等性质，并结合已有的研究基础，本课题拟通过配体交换反应，用大量的导向分子（叶酸衍生物）取代亲和素-金纳米粒子复合物中的大部分亲和素，得到表面组装大量导向分子和少量亲和素的靶向性金纳米粒子。然后将靶向性金纳米粒子通过亲和素与生物素的特异性结合反应修饰生物素化腺相关病毒（AAV）载体，最后得到靶向性金纳米粒子修饰的AAV载体。并以EGFP为报告基因，以TRAIL为治疗基因，考察靶向性金纳米粒子修饰的AAV载体体外、体内的靶向性、转染情况和抗肿瘤活性。这种修饰AAV载体的方法具有一定的通用性：通过金纳米粒子携带大量的导向分子提高AAV载体的靶向性；导向分子可以根据不同的组织或细胞很方便的进行更换。本课题为解决AAV载体以及其他病毒载体的靶向问题提供一种新的思路和方法，在肿瘤等疾病的基因靶向治疗方面有广阔的应用前景。

基因治疗已经成功的应用于临床研究。在基因载体方面，重组腺相关病毒(recombinant adenovirus-associated virus, rAAV)载体被视为目前最有前景的基因载体之一。然而，在临床研究中发现，rAAV载体具有广泛宿主范围，但这也导致其缺乏组织或细胞特异性，对病变的组织或细胞没有靶向性。针对基因靶向治疗的需要，本课题首先制备得到了叶酸衍生物修饰的靶向金纳米粒子，并将它修饰rAAV载体，得到靶向性金纳米了修饰的rAAV载体，并通过基质辅助激光解析飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）、透射电镜(TEM)等手段进行了表征。同时，用叶酸直接修饰rAAV载体，得到叶酸修饰的rAAV载体。虽然，rAAV载体修饰后的对叶酸受体表达不同肿瘤细胞的转染结果没有显著性差异；但是，本课题为解决AAV载体的靶向问题进行了一次有益的尝试。.同时，继续金纳米粒子在生物分子检测方面的研究，利用金纳米粒子表面自组装技术得到金纳米探针（MBN），再通过磁性分离技术分离、纯化，然后用MALDI-TOF MS进行检测，建立了一种检测方法：质量编码纳米探针、靶基因和磁珠探针形成夹心式结构，通过磁珠探针富集和分离样品，然后质谱检测编码分子，实现对靶基因的检测，达到较高的灵敏度(10-15M)，满足实际检测的要求；同时，实现对靶基因单核苷酸多态性（SNP）的检测以及高通量检测。