IFN-tau调控奶牛胎盘滋养层上皮细胞BoLA-I表达的机制研究

BoLA-I时相性差异表达在奶牛妊娠建立或同种半异体免疫排斥中起关键作用。IFN-tau是反刍动物妊娠识别因子，对MHC-I表达具有调控作用，其在胎盘滋养层上皮细胞中分泌，但受体却在母体子宫。生殖激素、IFN-tau和BoLA-I在不同的孕期的表达是有差异的，但这三者的差异表达的内在关系至今尚不清楚。本项目旨在①建立胎盘滋养层上皮细胞体外培养技术；②检测不同孕期主要生殖器素水平；③通过体外模拟体内激素水平，采用RT-PCR技术和ELISA技术检测胎盘滋养层上皮细胞的IFN-tau的动态表达水平，研究不同孕期IFN-tau的表达特点；④通过不同浓度的激素和IFN-tau水平作用于体外培养的胎盘滋养层上皮细胞，采用RT-PCR技术检测BoLA-I表达水平，研究生殖激素、IFN-tau调节奶牛胎盘滋养层上皮细胞BoLA-I差异表达的分子机制。

BoLA-I时相性差异表达在奶牛妊娠建立或同种半异体免疫排斥中起关键作用。IFN-τ是反刍动物妊娠识别因子，对MHC-I表达具有调控作用。其在胎盘滋养层上皮细胞中分泌，但受体却在母体子宫。.项目采用奶牛孤雌胚体外培养和滋养层细胞体外纯化和培养技术、子宫上皮细胞培养技术、定量PCR技术、抗体自备技术、ELISA，Western Blot技术和免疫组化技术研究了生殖激素、IFN-τ和BoLA-I三者之间的调控关系。①定量PCR发现，高水平的孕酮(10ng/mL) 在12h和24h均显著地上调滋养层细胞 IFN-τ mRNA 表达(P<0.05)，但雌激素（25pg/mL和50pg/mL)在12h和24h均显著地下调IFN-τ 表达(P<0.05)。②ELISA检测发现，孕酮或雌二醇作用下的IFN-τ蛋白水平变化趋势与IFN-τ mRNA一致，但中等水平的孕酮（5ng/mL）作用下的IFN-τ浓度似乎更高(P<0.05) 。高水平的雌二醇（50pg/mL）在24h极显著地降低了IFN-τ蛋白浓度(P<0.01)。③定量PCR发现，不同浓度和作用时间的IFN-τ均显著地上调MIC1, BoLA-A, Heavy chain 和BoLA-N*01201（p＜0.05）。BoLA-NC1*，BoLA-NC3*，A11， BoLA-N*03101和BoLA-N*03701的表达几乎不受IFN-τ影响(p＞0.05)。④BoLA-A，Heavy chain和MIC1的Western Blot进一步了结果证实BoLA-I蛋白表达水平。以上研究结果说明，孕酮上调IFN-τ表达，雌激素抑制IFN-τ表达；IFN-τ差异调节BoLA-I表达。本研究揭示了生殖激素——IFN-τ——BoLA-I调控通路。.本项目研究揭示的“生殖激素—IFN-tau—BoLA-I”在奶牛妊娠建立中的时相关系，对进一步阐明妊娠的生理机制和分子机理具有显著的科学理论价值，为从分子水平研究选配选育技术和方法、提高动物受孕率奠定了理论基础和提供了技术措施，在动物生产领域具有较为广阔的应用前景。