博卡病毒MVC感染致靶细胞凋亡的分子机理研究

博卡病毒亚家族(MVC,BPV,HBoV)属细小病毒家族成员之一，博卡病毒的感染与呼吸道及肠道急性感染性疾病存在密切的关系。但是博卡病毒致病的分子机制研究鲜有报道。课题组在前期研究中成功获得了博卡病毒MVC感染性克隆载体，分析了病毒基因组序列特点及DNA复制、转录的特性。本研究在已有研究基础上，深入探讨病毒感染致细胞凋亡的分子机理，研究病毒非结构蛋白NS1、NP1在病毒感染致病过程中可能的作用；同时深入研究p53及下游功能蛋白在病毒感染中的作用及信号机制。研究结果将深化对博卡病毒DNA复制、转录及组织感染的认识，揭示病毒致病的分子机理，同时也将对人亚型博卡病毒HBoV的分子感染性克隆的建立，病毒基因分子特性提供前提和基础。

本研究课题的目标是研究博卡病毒MVC感染致靶细胞凋亡的分子机理：通过研究MVC引起细胞病变的作用机制、细胞病理改变类型、凋亡通路及凋亡相关蛋白p53及其下游调节蛋白或酶的变化、病毒关键基因NS1、NP1的表达蛋白在细胞病变中的可能作用等方面阐述病毒致病的分子机制。. 通过三年的科学研究，完成了预期的研究内容，达到了研究目标。我们通过LDH活性分析和HA活性分析、Hoachest、DAPI以及PI染色、TUNEL、流式细胞仪分析等几个方面证实博卡病毒MVC感染致靶细胞的病变类型与引起细胞凋亡有关；通过Caspase-3活性变化、caspase抑制剂、P53蛋白表达及磷酸化水平、Parp蛋白的表达水平及细胞活力变化、P53沉默稳定细胞系的建立及相关的研究内容研究证实博卡病毒MVC感染致靶细胞发生凋亡主要表现为内源性凋亡通路的激活有关，p53在MVC感染致靶细胞病变中发挥了重要作用；同时通过检测CHOP、GRP78的表达水平，证实内质网激活通路也在MVC感染中发挥了一些作用；通过构建NS1、NP1真核表达载体，研究证实病毒关键基因NS1、NP1的表达蛋白对靶细胞没有影响作用。. 在本基金的资助下，培养研究生2名，培养青年教师1名。发表学术论文及综述2篇，其中论著一篇（英文）SCI收录，综述一篇为国内核心（微生物学报）；修回论文2篇（SCI 1篇，1篇中文）；正在撰写论文3篇（SCI 1篇，2篇中文）。参加国际学术会议（国内召开）并做学术交流报告1次。. 通过本课题的研究，取得了一些研究成果。明确了博卡病毒MVC感染致靶细胞凋亡的基本分子机制，为我们下一步深入研究奠定了基础。此项成果为我们进一步揭示人博卡病毒治病的分子机理研究提供了前提和基础。