蛋白激酶Cζ调控肽酰基精氨酸脱亚胺酶-4活性干扰中性粒细胞外诱捕网参与RA发病的机制研究

Rheumatoid arthritis (RA) is one of the severe disabling diseases. The release of Neutrophil extracellular trap (NET) following activation of PAD4 plays important role in the pathogenesis of rheumatoid arthritis. Our previous work showed: The neutrophil from peripheral blood and synovial fluid expressed NET in correlation with activation level of PKCζ, furthermore, by knocking down PKCζ expression, the arthritis in CIA model is suppressed. Based on our preliminary experiments, we put forward the hypothesis: PKCζ may activate PAD4 via NADPH oxidase/ NF-κB pathway, and SiRNA inhibiting PKCζ expression might cause relief of RA. According to the hypothesis, we intend: (1)to determine whether or not PKCζ participate the pathogenesis of RA by affecting NETosis via PAD4 activation. (2)to identify whether or not PKCζ affect PAD4 by NADPH oxidase/ NF-κB pathway. (3)to test the feasibility of targeting PKCζ for RA therapy. By animal model, biochemical and biological techniques the proposed study is expected to reveal the mechanism of PKCζ in the pathogenesis of RA and provide new strategy for the specific therapy in RA.

类风湿关节炎(RA)是主要的致残性疾病之一。肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PAD4）参与的中性粒细胞外陷阱（NET）的释放在RA的发病中起到重要作用。前期研究中我们发现RA患者关节液及外周血中性粒细胞表达NET与PKCζ活化水平相关，同时小样本在体干预发现敲减PKCζ对小鼠CIA关节炎具有抑制作用。基于预试验结果，我们提出假说：PKCζ通过NADPH氧化酶和/或NF-κB信号途径活化PAD4，继而促进NETosis，参与RA发病；PKCζ的特异抑制SiRNA可能改善RA的发病。本项目拟研究：1)明确PKCζ是否通过影响PAD4活化影响NETosis从而参与RA发病。2)明确PKC ζ是否通过影响NADPH氧化酶以及NF-κB通路，影响PAD4活化，进而调控NETosis。3)探索阻断PKCζ治疗RA的可能性。本研究为PKCζ调控PAD4在RA发病中的意义提供实验依据，也为RA治疗提供实验基础。

类风湿关节炎（RA）是主要的致残性疾病之一。肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PAD4）参与的中性粒细胞外陷阱（NET）的释放在RA的发病中起到重要作用。课题组在课题进行期间进行了以下研究：建立基于人M3髓系白血病HL-60细胞系的NETosis研究模型、观察类风湿关节炎患者血清NETosis产物MPO-DNA复合物水平与疾病活动度及药物治疗反应间的相关性、针对RA患者自发NETosis是否为NOX依赖通路进行初步验证。我们成功构建了基于HL-60细胞系的NETosis模型，通过更大样本证实在RA患者血清中MPO-DNA复合物水平可以作为反映自发NETosis水平的指标，并且发现该指标在RA中显著高于骨关节炎及健康对照；同时发现治疗前后MPO-DNA复合物水平的变化可以预测后续疾病的持续缓解状态。研究结果对于进一步开展NETosis机制研究以及制定RA个体化治疗策略具有重要科学价值及应用前景。