DC在布鲁氏菌持续性感染形成中的作用及机制研究

布病具有持续性慢性感染特征，机制不明，DC处于启动、调控、维持免疫应答的中心环节，布鲁氏菌诱导的不成熟DC可能与此紧密相关。因此，本课题以布鲁氏菌强毒Dsred-16M气溶胶感染BALB/c小鼠造成持续性感染为模型，并以疫苗GFP-M5被有效清除为对照，在不同感染阶段，通过活体发光、免疫细胞示踪、激光共聚焦等，实时动态观察组织中DC、B、CD4+T、CD8+T的变化；通过ELISA等，检测MCP-1、IFN-γ、IL-17等变化；找到特异性变化的细胞或分子，通过添加或沉默确定它们的功能；通过免疫细胞分离和混合培养，确定此特异性变化与不同阶段DC之间的关系；通过分析DC分泌的细胞因子和表面配体的表达，确定DC的亚群，并可能找到新的DC亚群；最后，在免疫缺陷动物和细胞模型上进行验证；旨在阐明DC在布鲁氏菌持续性感染形成中的作用及机制，同时为布病防治提供急需的免疫干预靶点和一定的理论指导。

近年来，布鲁氏菌病（布病）死灰复燃，已严重威胁牧区人民的生命健康，并有借助食物链向城区扩散的风险。然而，迄今尚无满意的慢性布病防治办法。持续性慢性感染是布病难防难治的根本原因，但是布鲁氏菌导致机体慢性感染的致病机制不明，猜想是布鲁氏菌免疫逃逸、机体免疫耐受所致。DC 是启动、调控、维持免疫应答的中枢，布鲁氏菌与宿主DC交互对话影响深远，DC既为布鲁氏菌体内存活提供庇护所，又为机体免疫耐受创造条件，影响机体特异性免疫保护的正常启动，恢复DC的正常功能可能是防治慢性布病的关键。因此，本课题以布鲁氏菌强毒Dsred-16M 滴鼻感染C57BL/6小鼠造成持续性感染为模型，并以疫苗GFP-M5 被有效清除为对照，实时观察血液、肝脏、脾脏组织中布鲁氏菌、DC、B、CD4+T、CD8+T 、MCP-1、CCL-3、CSF3、IL-17的动态变化，找到特异性变化的细胞或分子并研究它们的功能；通过分析DC分泌的细胞因子和表面配体的表达，确定DC 的亚群；确定机体免疫状态的特异性变化与不同亚群DC 之间的关系；分析布鲁氏菌调控DC分化的表观遗传机制；最后，在免疫缺陷动物和细胞模型上进行验证。研究表明，GFP-M5疫苗株与Dsred-16M强毒株能够引起小鼠明显不同的免疫学反应，其获得性免疫保护水平差异显著，而且DC分化及成熟程度明显不同，它们之间的相互关联研究还在进行中；对布鲁氏菌感染的DC亚类进行了mRNA/lncRNA/microRNA深度测序，表明抗原递呈、干扰素激活、细胞凋亡信号通路均存在明显差异，这在临床布病患者和疫苗免疫群体样本中也得到了确认；但具体免疫和调控分子的功能研究还在进行中。这为阐明DC 在布病持续性感染形成中的作用机制提供了一定的线索。