黄体生成素受体的选择性剪切在多囊卵巢综合症发病中的作用机制研究

Polycystic ovary syndrome (PCOS) is the most common disorder in the childbearing age of women, which is often accompanied by insulin resistance and significantly increased the risk of diabetes and cardiovascular disease. As a seven-transmembrane G protein-coupled receptor, luteinizing hormone receptor (LHR) has a variety of isomers which is produced by in vivo alternative splicing. Previous studies have shown that the incidence of PCOS is closely related to LHR, and alternative splicing as a cause of the disease attract more and more attention. In our study, we found that LHR isoforms is differentially expressed in theca cells of normal subjects and patients with PCOS with Realtime PCR. Therefore, we speculate that alternative splicing of LHR in theca cells is in a state of equilibrium and the variety of isoforms exist in a certain proportion. However, in PCOS patients, this balance was broken, which resulting in increased ovarian androgen synthesis and the clinical manifestations of hyperandrogenism. So, we intend to study the mechanism of abnormal splicing from the perspective of splicing binding sites and the splicing factors. Finally, by looking for factors affect alternative splicing, it can be used as a potential target to control hyperandrogenism in PCOS.

多囊卵巢综合症(PCOS)是一种育龄妇女最常见的疾患，往往同时伴有胰岛素抵抗，使发生糖尿病和心血管疾病的危险性显著升高。黄体生成素受体(LHR)作为一种具有7次跨膜结构的G蛋白耦联受体，在体内存在选择性剪切，出现多种剪切异构体。既往的研究表明LHR与PCOS的发病密切相关，而选择性剪切作为疾病的发病因素得到了越来越多的重视。我们通过realtime PCR发现，正常人与PCOS患者卵泡膜细胞中LHR剪切异构体存在差异性表达。因此，我们推测卵泡膜细胞内LHR的选择性剪切处于一种平衡状态，各种剪切异构体的表达存在一定的比例，而PCOS患者中这种平衡状态被打破，导致卵巢雄激素合成增多，出现高雄激素血症的临床表现。我们拟从剪切结合位点以及剪切因子的角度来研究导致选择性剪切异常的机制。最后，通过寻找影响选择性剪切的因素，可以作为潜在靶点纠正PCOS患者高雄激素血症。

我们在对LHR剪切突变的功能研究中，意外发现了新的LHR剪切异构体(LHR-6A)。由于LHR 6号内含子中存在2个潜在剪切位点，可分别将159bp和207bp的内含子序列加入编码区中，形成短型(LHR-6A-short)及长型(LHR-6A-long)的剪切异构体，由于存在终止密码，其翻译产物均为含209个氨基酸的截短蛋白质。体外试验发现，此截断的蛋白质不能定位于细胞膜上，也不能与125I-hCG结合。通过realtime PCR 和western blot分析，结果显示LHR-WT与LHR-exon6A在PCOS和非PCOS卵泡膜细胞中的表达存在差异。在exon6A序列中存在3个高频的SNP，其中rs68073206位于外显子6A的剪切供位的+5’位，在101例正常人中，GG、TG 和 TT 基因型的频率分别为9.9 %, 49.4%,和40.7%。对32例不孕不育女性颗粒细胞的研究发现，GG基因型中，LHR-6A-long转录产物显著升高，体外实验将GG型的质粒转染293T细胞，结果与体内实验相吻合。收集133例无精症患者，138例少弱精症患者，210例正常受试者。比较3组人群中SNP rs68073206不同基因型的差异，结果显示正常与无精症，正常与少精症之间均无显著性差异。比较正常人群中SNP rs68073206不同基因型之间性激素的差异，结果显示这三种基因型与LH, FSH和ASI无明显相关。睾酮水平在TT和GG基因型之间存在显著性差异，在TT+TG和GG之间存在显著性差异。此外，在基金资助下，我们进行了大型流行病学调查，研究了维生素D与胰岛素抵抗之间的关系，论文已经被Plos one杂志修回；研究了颈围与非酒精性脂肪肝的关系，文章发表在Nutr Metab上。另外，报道了一例严重痛风合并双手巨大痛风石的患者，已被Lancet Diabetes & Endocrinology接受。SCGB3A2是一种分泌蛋白，对现有的结果进行Meta分析，提示SCGB3A2的-112G>A位点不论在中国人群还是高加索人群中都是甲亢一个易感位点。相关文章已经发表在Endocrine杂志上。我们收集了7个17羟化酶缺陷症的家系，共15例患者，通过Haplotype分析，所有包含Y329fs突变的染色体都携带相同的单倍体，说明Y329fs这一突变在中国人群来源于同一祖先。