负调控天然免疫识别受体的核转录因子HMBOX1基因的发现与机制研究

NK细胞的功能效应很大程度取决于其天然免疫受体群谱的识别活化平衡状态，但有关NK细胞天然免疫受体或群谱的负向基因调控研究较少。本课题组在前期研究中发现新功能基因HMBOX1可能在转录水平对NK细胞活化型受体NKG2D具有负向调节作用，从而影响活化型受体NKG2D与抑制型受体NKG2A的表达平衡，对NK细胞进行负调节。本研究将分别建立HMBOX1过表达或HMBOX1-RNAi的NK细胞系，利用基因芯片对天然免疫受体相关基因进行更广泛的差异性表达分析，同时寻找NKG2D及相关受体作为HMBOX1下游调控靶基因的确切证据。将通过EMSA、萤光素酶报告基因系统、染色质免疫沉淀等技术确定HMBOX1基因过表达或缺失对NK细胞受体或相关基因启动子活性的影响，利用生物信息学对该转录因子的结合位点进行预测，最终阐明HMBOX1调控的确切基因靶标及其调节NK细胞功能的分子机制。

NK细胞的功能效应很大程度取决于其天然免疫受体群谱的识别活化平衡状态，但有关NK细胞天然免疫受体或群谱的负向基因调控研究较少。本研究在观察到新功能基因HMBOX1在NK细胞系和外周血新鲜NK细胞存在表达差异的基础上，分别建立HMBOX1过表达或HMBOX1-RNAi的NK细胞系发现HMBOX1可通过负向调节NKG2D/DAP10信号通路而抑制NK细胞的脱颗粒能力和杀伤功能，通过萤光素酶报告基因系统确定HMBOX1可靶向抑制IFN-r启动子的活性而抑制NK细胞IFN-r的表达和分泌；成功制备鼠抗人HMBOX1单克隆抗体，发现HMBOX1在肝癌和胃癌组织及细胞系中表达明显降低甚至缺失，并通过基因芯片技术分析可能参与调控的信号通路，发现HMBOX1能下调HepG2细胞肿瘤干细胞基因和促炎基因的表达，可能参与了肿瘤和免疫相关信号通路调控；成功建立了HMBOX1-/-小鼠，并初步观察到HMBOX1可能在NK/NKT细胞的发育分化过程中发挥调节作用。