桂枝茯苓丸活性成分的吸收机制和体内变化过程研究

桂枝茯苓丸疗效确切，具有活血化淤、缓消包块之功效，是治疗多种妇科疾病的经方。本项申请拟借助先进的中药多成分分析技术，整合 in silico、in vitro和in vivo等多种技术方法，运用"实测与预测相结合"的研究策略，围绕桂枝茯苓丸活性成分的化学组成、吸收机制和体内变化过程开展研究，揭示服药后桂枝茯苓丸在体内的主要化学形式，研究其浓度水平和动态变化特征，并寻找能反映服药后机体对桂枝茯苓丸暴露的各味组成中药的"药代Markers"。该研究将对揭示影响桂枝茯苓丸体内暴露的关键药代调控环节以开展下一步的配伍机制研究，促进对其药效物质基础和作用机理进一步认识，探索"化学→药代→药理/毒理"的中药药代研究模式均具有重要的意义。项目申请人及所在课题组多年来开展了大量中药多成分复杂样品分析方法学和中药多成分药代动力学研究工作，具备开展本研究的软硬件条件，为本项研究的成功实施打下了良好的工作基础。

桂枝茯苓丸疗效确切，是临床上治疗多种妇科疾病的经方，但至今桂枝茯苓丸全方的化学组成和药代方面的研究较为匮乏，且少数几个主要成分的研究并不能真正反映桂枝茯苓丸的体内变化过程。本项目借助先进的中药多成分分析技术，对该方进行全成分谱筛查和定量分析，共检测到77个化学成分，主要包括三萜类、氰苷类、苯丙素类、单萜糖苷类、没食子酰糖苷类、苯乙酮类、苯甲酸衍生物等。化合物在大鼠生物样品的检测与其剂量相关，成分剂量>10 mg/kg的成分除没食子酰芍药苷和没食子酰糖苷类外，其它成分均能大鼠血、尿或胆汁中检测到。剂量1～10 mg/kg的成分77%能被检测到，而成分剂量低于1 mg/kg的仅35%能测到。通过溶解性（in silico预测）、膜通透性（细胞模型实测和in silico预测）、肠外排和肠肝代谢（in vitro方法）和胆汁首过排泄（in vivo方法）等方面的结合分析，苯丙素类成分是口服给药桂枝茯苓丸后肠道吸收较好的成分，茯苓三萜类成分由于溶解性和脂溶性影响了其吸收，氰苷类、单萜糖苷类和没食子酰糖苷类成分主要由于极性表面积太大或首过代谢影响其吸收入血，没食子酸、丹皮酚则由于水溶性、脂溶性和代谢转化等因素影响其进入系统循环。口服给药桂枝茯苓丸后，来自茯苓的土莫酸，来自桂枝的桂皮酸，来自桃仁的苦杏仁苷、野樱苷，来自芍药丹皮的芍药苷、芍药苷内酯、丹皮酚、没食子酸和苯甲酸，被选为剂量依赖型PK markers以反映机体对给药桂枝茯苓丸的暴露。这些PK markers成分在大鼠体内可迅速消除，除芍药苷（t1/2 2.8 h）外，其它成分半衰期t1/2 <0.7 h。桂皮酸、丹皮酚、没食子酸和苯甲酸主要以代谢物形式经尿排出；苦杏仁苷、芍药苷和芍药苷内酯则主要以原型经尿排，因此代谢转化（包括P450酶、甲基化COMT代谢酶和甘氨酸转移酶）、尿排泄和肾转运体是进行主要桂枝茯苓丸成分暴露调控研究的重要环节和关键因素。桂枝茯苓丸PK markers成分在组织中达峰较快（约给药后5 min～1 h左右），这些成分在生殖器官子宫和卵巢均有分布，为其疗效作用的发挥提供了数据支持。.该研究全面揭示了桂枝茯苓丸的化学组成、相关主要活性成分的药代特征和影响体内暴露的关键药代调控环节，对促进其药效物质基础和作用机理进一步认识以及后续配伍机制研究均具有重要的意义。