miR-612在HADHA介导的侵袭性伪足形成中的作用及其机制

HCC metastasis is the key factor to influence the prognosis of liver cancer. According to our previous work, miR-612 was found to inhibit the EMT, local invasion and distant metastasis of HCC via the negative regulation of AKT2 expression and its function. In this project, we intend to further explore the functions of HADHA, another key target gene of miR-612, in lipid metabolism reprogramming especially in the β-oxidation of long-chain fatty acids and invasive pseudopodia formation (invadopodia), for comprehensive understandings of miR-612 in HCC metastasis as well as for establishing a theoretical basis of HCC prognosis and therapeutics based on miR-612.

肝癌转移是影响肝癌预后的关键。本研究小组在前期工作中发现miR-612负性调控肝癌细胞AKT2的表达和功能，抑制肝癌细胞EMT的形成以及肝癌的局部侵袭与远处转移。在本项目拟以miR-612的另一个候选靶基因HADHA为研究对象，进一步探讨miR-612对HADHA调控作用及其序列；明确miR-612重编程肝癌细胞脂肪代谢（Lipid metabolism reproogramming），尤其是脂肪酸β-氧化和侵袭性伪足(invadopodia)形成的影响,全面认识miR-612的肿瘤生物学功能，阐述miR-612调节肝癌转移的分子机制，为基于miR-612的HCC 转移分子预测及治疗奠定理论基础。

已经证明MicroRNA-612（miR-612）通过PI3K / AKT2和Sp1 / Nanog信号传导抑制肝细胞癌（HCC）的EMT，干细胞和肿瘤转移。然而，它在HCC进展中的生物学作用还远未阐明。在这里，我们报道了另一种miR-612的直接下游靶标hadha, 是一种新的HCC转移调节因子。在我们的体外和体内模型中，HADHA本身确实促进了细胞迁移和HCC的侵袭。 miR-612的异位表达可部分逆转HADHA水平，然后通过脂质重编程抑制伪足的功能并降低HCC的转移潜能。具体讲为，当通过蛋白质印迹和免疫荧光测定时，在miR-612敲低或过表达的HCC细胞系中，invadopodia，Cortactin和Caveolin-1的两种关键蛋白显着上调。并且HCCLM3miR-612-OE和HCCLM3hadha-KD细胞的最大耗氧率（OCR）几乎下降了40％和60％（p <0.05）。在外源miR-612或hadha-shRNA转染的HCCLM3细胞系中，乙酰CoA的水平显着降低，约为其对照的1/3（p> 0.05）或1/2（p <0.05）。同时，HCCLM3miR-612-OE（p <0.05）和HCCLM3hadha-KD（p <0.01）的ATP水平分别降至1/2和1/4。临床标本分析中miR-612水平与HCC切除组织中HADHA表达水平呈负相关。 miR-612水平低，HADHA水平高的患者预后不良，总生存期较短。总之，miR-612可通过HADHA介导的脂质编程抑制invadopodia和HCC转移的形成，这可能为miR-612对肿瘤转移和进展提供新的见解。