基于“部位敲除法”研究中药菝葜抗炎有效部位群及其作用机制

For the flaws and shortcomings of the active groups research methodology of traditional Chinese medicine, the idea and method of Effective Part Knocked out Method is proposed. This method not only gives full consideration to the synergy and interaction of the direct effects and indirect effects in traditional Chinese medicine, so that a more comprehensive study of the effective parts of traditional Chinese medicine, but also saves a lot of manpower, material and financial resources. First, the different chemical parts of volatile components, tannins, flavonoids and saponins of Rhizoma Smilacis Chinae are separated and purified by modern separation technology such as macroporous resin technology and supercritical fluid extraction separation technology, the purity of the above chemical parts after purification is up to 50%, and then the direct anti-inflammatory effective parts and indirect anti-inflammatory effective parts of Rhizoma Smilacis Chinae are screened out using the rat paw edema test, the mouse ear swelling test and metritis experiments in rats with Effective Part Knocked out Method. Then the action mechanism is studied not only by researching effect on inflammatory mediators such as PGE2, HA ,5-HT and other cytokines such as IL-1β, IL-6 and TNF-α in inflammation model rat uterus，the action mechanism is studied but also by researching effect on MAPKs and NF-κB inflammatory signaling pathway.

本项目针对目前中药“有效部位群”研究方法的缺陷和不足，提出了“部位敲除法”研究中药有效部位群的思路和方法，并将该方法用于中药菝葜抗炎有效部位群及其作用机制研究。该思路和方法充分考虑到中药中起直接作用和起间接作用的有效部位的协同作用、交互作用，使中药有效部位群的研究更全面、系统。本项目首先采用大孔吸附树脂等现代技术分离纯化菝葜中挥发性成分、鞣质类成分、黄酮类成分、皂苷类成分和其它类成分等化学部位，然后采用“部位敲除法”的研究思路，采用小鼠耳肿胀实验、大鼠足跖肿胀实验、大鼠子宫炎实验等经典实验方法筛选出菝葜直接抗炎有效部位和间接抗炎有效部位，继而采用大鼠子宫炎症模型研究菝葜不同有效部位对子宫炎症模型大鼠子宫组织中PGE2、HA、5-HT等炎症介质和IL-1β、IL-6和TNF-α等炎性细胞因子的影响及对MAPKs和NF-κB炎性信号通路的影响，探讨菝葜各有效部位的抗炎作用机制。

本项目针对目前中药“有效部位群”研究方法的缺陷和不足，提出了“部位敲除法”研究中药有效部位群的思路和方法，并将该方法用于中药菝葜抗炎有效部位群及其作用机制研究。本项目首先采用大孔吸附树脂等现代技术分离纯化菝葜总黄酮类、总皂苷类和总鞣质等化学部位，使其纯度分别达到75%、52%、59%, 然后采用“部位敲除法”的研究思路，采用小鼠耳肿胀实验、大鼠足跖肿胀实验、大鼠子宫炎实验等经典实验方法进行研究，确定菝葜总黄酮、总皂苷、总鞣质均为菝葜抗炎有效部位。继而采用大鼠子宫炎症模型研究菝葜不同有效部位对子宫炎症模型大鼠子宫组织中PGE2、HA、5-HT等炎症介质和IL-1β、IL-6和TNF-α等炎性细胞因子的影响及对MAPKs和NF-κB炎性信号通路的影响，结果表明，菝葜总黄酮、总皂苷、总鞣质有效部位通过降低ERK、JNK和p38的磷酸化水平抑制MAPKs信号通路的激活，从而抑制NF-κB的核易位及其下游炎症细胞因子表达，进而起到抗炎的作用。本项目探讨了菝葜有效部位的抗炎作用机制，为将菝葜深入开发为药效物质基础明确、作用机制清楚的现代中药奠定坚实基础，同时实践和探索“部位敲除法”研究中药有效部位群的思路和方法，为其它中药及复方的研究提供参考和借鉴。