BRAF基因突变在胰腺癌发生和发展中的作用

BRAF基因编码一种丝/苏氨酸特异性激酶(serine/theronine-specific kinases)，是RAS-RAF-MEK-ERK-MAPK通路重要的转导因子，参与调控细胞内多种生物学事件，如细胞生长、分化和凋亡等。在人类肿瘤的发生和发展过程中，BRAF蛋白可能独立于RAS蛋白而发挥作用。在预实验中，本课题组采用自制的基因芯片、Western blot和激光共聚焦显微镜技术，发现该家族成员BRAF在不同的胰腺癌细胞株中的表达差异较大，推测可能与胰腺癌细胞的转移能力有关。在此基础上，本课题拟采用激光显微切割、PCR、DPHLC、测序和定量RT-PCR等技术，研究BRAF在胰腺癌组织中的突变情况、mRNA和蛋白的表达；应用免疫组化检测其组织学定位；应用细胞转染、RNAi和裸鼠移植瘤等实验，探讨该基因与肿瘤细胞的生长和转移等关系，以期明确BRAF在胰腺癌的发生和发展中的作用。