基于“髓养骨”理论研究滋肾填精法防治PMOP的网络化调控机制

大量临床研究和实验研究证明，以补肾立论，采用中医药防治绝经后骨质疏松症疗效明确而明显无毒副作用，且具有多途径、多环节、多靶点起效之特色与优势。本项目拟在 "肾-精-髓-骨"的中医相关理论指导下，以"髓养骨"为切入点，提出"滋肾填精法通过多途径、多环节、多靶点发挥对骨髓间充质干细胞的网络化调控作用，防治绝经后骨质疏松症"的机制假说，依据时间序列研究方式，应用表达谱芯片技术及深层生物信息学分析方法，从对骨髓间充质干细胞的调控角度，探索滋肾填精法防治实验性PMOP的网络化调控机制。除对芯片结果进行常规聚类分析、GO 分析及Pathway分析外，还将进行基因关系网络分析，并对其中的关键差异基因进行实时定量PCR及Westernblot检测，从RNA及蛋白质水平共同验证芯片实验结果。以期丰富和深刻揭示中医药防治PMOP的作用原理，也对后基因组时代下创新中医药研究思路进行探索。

本项目立足深刻发掘滋肾填精法防治绝经后骨质疏松症（PMOP）的基因组学机制，应用基因表达谱技术，以滋肾填精经典名方左归丸为载体，雌二醇为阳性对照药，从骨髓间充质干细胞（BMSCs）切入，在常规聚类分析等“点”层面基础上，依据时间序列和基因共表达网络分析等生物信息挖掘手段，分别在“线”和“面”的更高维度进行探索，发现：1.不同干预对BMSCs基因表达的影响存在明确的时间规律：去卵巢可能通过中期上调效应影响Foxn1、Slc39a4和Ctrb1等表达引发骨质疏松；中西药均可通过早期下调Ppig、Rb1cc1抑制骨丢失，而中药靶基因明显多于雌二醇。2.去卵巢后BMSCs基因共表达改变佐证了免疫因素在PMOP发病中的作用（关键基因如Cldn14、Clec4f、Foxn1、Mog等）；而雌二醇治疗共表达网络中活跃基因多与雌激素及雌激素受体相关（Nell2、Sytl1、Adcy 10）。3.左归丸存在两个网络功能模块：一个模块所含基因同多种慢性疾病相关；另一模块则表现出与骨质疏松症高度相关（Ttpa、Sema3d、Lrp2），此外，雌激素相关基因也在该模块中被发现（Slc22a5，Plac1）。以上结果充分证实了本课题的立项假说，达到并在某些层面超出预期，为后基因组时代下探索中医药多途径、多环节、多靶点整体调控的作用优势做出有益尝试。