急性单核细胞白血病新基因MLAA-34表达调控机制研究

MLAA-34 is a representative new antigen,screened by our laboratory using the SEREX method in U937 cell line. Previous Real-time PCR and Western Blot data indicated that MLAA-34 was over-expression in U937 cells and AML-M5,but upregulation mechanism has not been studied.In order to further investigate upregulation mechanism of MLAA-34 in U937 cells and AML-M5, this subject intends to carry out high-throughput sequencing in normal U937 cells and M5 patients to identify MLAA-34 gene mutation, further through the promoter activity analysis of MLAA-34 gene proximal regulatory regions fragment and screening and identification of its interacting transcription factor, and detection of MLAA-34 gene promoter region CpG island methylation patterns,so as to put forward its possible upregulation molecular pathways, provide new clues for in-depth understanding of acute monocytic leukemia pathogenesis.

MLAA-34是我们课题组利用SEREX对U937细胞株筛选的具有代表性的新抗原。应用实时定量PCR及Western Blot研究发现MLAA-34在U937细胞及急性单核细胞白血病患者中高表达，但表达上调机制尚未研究。为进一步了解MLAA-34在U937细胞及M5患者中表达上调的机制，本课题拟应用高通量测序仪对U937细胞及M5患者的MLAA-34基因测序并行基因突变分析，进一步通过对MLAA-34基因近侧调控区域片段的启动子活性的分析及其相互作用转录因子的筛选和鉴定，并且检测MLAA-34 基因启动子区 CpG 岛甲基化模式，研究其可能的具体上调分子机制，为深入研究急性单核白血病的发病机理提供新线索。

MLAA-34（GenBank:AY288977.2）是我们课题组利用“重组cDNA表达文库血清学分析法(SEREX)”对人单核细胞白血病细胞株U937筛选的具有代表性的新抗原，我们前期研究发现MLAA-34在U937细胞系及M5白血病患者中高表达。本项目通过一系列的实验研究，我们已基本阐明了MLAA-34基因表达调控的机制，包扩：1、在临床M5患者中进行mlaa-34基因全外显子测序，发现突变与基因表达的关系；2、确定MLAA-34的核心启动子序列及转录因子，尤其是STAT3；3、分析了MLAA-34基因启动子区CpG岛甲基化模式。4、借助基因芯片技术对人类全基因组进行检测，筛选出差异基因并进行GO和pathway分析，证实了MLAA-34可与JAK/STAT3信号通路形成正反馈，从而增强M5白血病细胞抗凋亡作用。我们的研究进一步阐述了MLAA-34的分子作用机制，为深入研究急性单核细胞白血病的发病机理提供新的线索，为今后的肿瘤靶向治疗提供了一定的理论依据。