急性单核细胞白血病相关抗原新基因MLAA-22功能的研究

白血病瘤苗研究的突破有赖于更多TSA和TAA的鉴定和发现，MLAA-22是本课题组前期采用SEREX方法从U937细胞筛选获得的新基因之一。前期通过RACE技术获得了其cDNA全长为3070bp，染色体定位于17q11.2，CDS全长2106bp（360-2465bp），编码的蛋白质由701个氨基酸残基组成；RNAi下调U937细胞中MLAA-22基因的表达后发现：U937细胞生长速度减缓，凋亡率明显增加，初步推测MLAA-22可能是一个M5相关的抗凋亡基因。本研究将采用SSH技术对MLAA-22表达下调前后U937细胞的基因表达谱进行比较、分析，从而获得更多基因功能方面的信息；利用免疫共沉淀技术获得MLAA-22相互作用的蛋白并进行质谱分析，对MLAA-22进行细胞信号转导通路定位，初步阐明新型蛋白在M5发病中的的作用及其机制，为MLAA-22应用于急性单核细胞白血病免疫治疗奠定理论基础

MLAA-22是本课题组前期研究获得的急性单核细胞白血病相关抗原，本研究旨在深入研究、系统评价MLAA-22在M5疗效判断、预后评估及靶向治疗方面的应用前景。本研究首先扩大临床初诊、治疗后完全缓解及难治/复发M5骨髓血样本的收集，分别采用荧光实时定量PCR及westernblot检测其MLAA-22mRNA及蛋白表达水平的变化；同时采用免疫荧光技术对MLAA-22蛋白的细胞定位进行了研究；在基因功能方面采用MLAA-22 RNAi慢病毒颗粒感染U937细胞株，采用DNA Ladder检测凋亡，并对干扰前后的细胞利用基因芯片技术筛选获得与MLAA-22相关的基因；利用生物信息学方法预测获取MLAA-22 HLA-A2+限制性CTL识别的表位，鉴定得到优势表位肽段，并通过体内、体外实验验证了优势表位肽的特异性CTL杀伤活性。. 结果表明：初诊M5与完全缓解及难治/复发M5患者MLAA-22基因及蛋白表达均存在显著性差异，表明了MLAA-22在M5中的特异性高表达；免疫荧光技术研究表明MLAA-22蛋白表达于肿瘤细胞的核膜；DNA Ladder检测发现MLAA-22 mRNA下调后U937细胞凋亡增减加，且细胞凋亡与时间有一定关系，进一步证实了MLAA-22的抗凋亡作用；MLAA-22 mRNA下调前后基因芯片高通量筛选分别获得了上调和下调水平前10位的相关基因，并对这些可能与MLAA-22作用有关的基因进入下一步研究；生物信息学软件预测获得了得分前10的优势表位肽，体内、体外实验验证了优势表位肽LLPNAIYKV能够有效激活肿瘤细胞特异性CTL杀伤活性，LLPNAIYKV可作为MLAA-22免疫治疗的候选多肽片段。结论：MLAA-22在M5患者中特异性高表达，是M5相关的抗凋亡基因，它在M5的诊断、微小残留病监测、预后判断及分子靶向治疗中具有一定的应用前景，值得进一步深入研究。