人源单链抗体导向的甲状腺髓样癌放射免疫靶向治疗系统

本课题采用噬菌体抗体库技术制备抗甲状腺髓样癌人源单链抗体，即通过RT-PCR直接从甲状腺髓样癌患者B淋巴细胞RNA克隆出免疫球蛋白可取变基因。将抗体可变区基因与单链丝状噬菌体衣壳蛋白基因融合，使人源抗体（humanized antibody）随衣壳蛋白一起展示表达于噬菌体表面，通过吸附－洗脱－扩增富集的筛选，便可得到甲状腺髓样癌人源单链抗体。用放射性核素标记后，进行甲状腺髓样癌放射免疫靶向治疗的研究，以期为治疗方案单一的甲状腺髓样癌患者提供一种有效的辅助治疗手段。

研究背景：甲状腺髓样癌（MTC）是起源于甲状腺滤泡旁细胞（C细胞）的恶性肿瘤，占甲状腺癌的8%～10%，但死亡率达到了13.4%，MTC恶性程度高，易于局部扩散或远处转移。因此，做到早期诊断，早期手术且予以合适的辅助治疗对改善患者的预后非常重要。然而该病早期无特殊症状，也无特异性表现，因此诊断存在困难。目前认为，除了外科手术，其他治疗方法效果欠佳。外放射治疗和化学药物治疗对MTC并无确切疗效。MTC不同于PTC和FTC，对碘的吸收功能很差，故放射性内照射辅助治疗在MTC患者身上亦行不通。因此，提高对该病的认识，做到早期诊断，早期手术且予以合适的辅助治疗对改善患者的预后非常重要。.研究方向：利用放射性核素偶联具有导向性特异抗体制成放免药物进行体外显像和体内治疗的方法，称为放免显像(RII)和放免治疗(RIT). .主要内容：应用噬菌体抗体库技术构建甲状腺髓样癌人源单链抗体（ScFv：是用基因工程方法构建的抗体功能片段，它是在抗体的重链可变区（VH）序列与轻链可变区序列(VL)之间，用1个人工短肽序列连接而成。该抗体除了消除鼠源性抗体应用带来的人抗鼠抗体（HAMA）及单克隆抗体分子质量大，穿透能力差，靶/非靶比值低，血清清除慢等问题）作为特异抗体，标记放射性核素后，对荷人甲状腺髓样癌裸鼠行放免显像及治疗.重要结果：.1.甲状腺髓样癌人源噬菌体单链抗体的制备 包括人源单链抗体基因文库的构建、筛选及其鉴定。.2.单链抗体的标记，并测定其标记率、放化纯度及免疫活性。.3.人甲状腺髓样癌细胞株的培养及荷人甲状腺髓样癌裸鼠模型的建立。.4.用放射性核素标记的单链抗体进行甲状腺髓样癌放免显像研究 包括了解单链抗体在荷瘤动物体内的分布，确立最佳显像时间、显像条件等。.5.用放射性核素标记的单链抗体进行甲状腺髓样癌放免治疗研究 包括在荷瘤动物和体外培养细胞两种情况下，标记的ScFv对瘤体及细胞的放免治疗疗效观察。.关键数据及其科学意义：.1.甲状腺髓样癌人源噬菌体单链抗体的制备 .2. 放射性核素标记人源单链抗体 .3. 标记单链抗体在荷瘤动物模型中的放免显像 最佳显像条件的确立，结果观测方法的建立。.4、标记单链抗体在荷瘤动物模型及体外培养细胞中的放免治疗疗效观测方法的建立。