Cbl家族抑制HER-2介导的乳腺癌他莫昔芬耐药机制的研究

他莫昔芬（TAM）耐药是乳腺癌内分泌治疗的常见问题，发生机制不明。HER-2与ER在细胞膜上Cross-talk是TAM耐药的关键。研究显示：HER-2 过表达时，ER由核转位于胞膜与c-Src及HER-2形成ER-c-Src－HER-2复合物，而三聚体的形成及活化均与脂筏功能相关。因此，我们认为：脂筏聚集是ER-c-Src-HER-2复合物形成的必要条件。新近研究发现：泛素连接酶Cbl-b可抑制脂筏聚集，c-Cbl可介导c-Src的泛素化降解，因此，我们推测： Cbl家族可能通过抑制脂筏聚集，促进c-Src的泛素化降解，抑制ER-c-Src-HER-2复合物形成，从而阻断HER2与ER之间的Cross-talk，参与HER-2介导TAM耐药的调控。本研究将进一步明确HER-2介导乳腺癌TAM耐药的发生机制，为临床上预测TAM疗效及研制新型内分泌治疗药物提供实验基础。

他莫昔芬（TAM）耐药是乳腺癌内分泌治疗的常见问题，发生机制尚不清楚。既往研究提示，HER-2与ER在细胞膜上Cross-talk可能是TAM耐药的关键。HER-2 过表达时，ER由核转位于胞膜与c-Src及HER-2形成ER-c-Src-HER-2复合物，而三聚体的形成与脂筏功能密切相关，因此我们认为：脂筏聚集是ER-c-Src-HER-2复合物形成的必要条件。最近研究发现：泛素连接酶Cbl-b可抑制脂筏聚集，c-Cbl可介导c-Src的泛素化降解，因此，我们推测：Cbl家族可能通过抑制脂筏聚集，促进c-Src的泛素化降解，抑制ER-c-Src-HER-2复合物形成，从而阻断HER2与ER之间的Cross-talk，参与HER-2介导TAM耐药的调控。本课题选用HER-2过表达的BT474细胞及HER-2阴性的T47D细胞进行TAM药物敏感性的研究；应用脂筏抑制剂验证脂筏对ER-c-Src-HER2三聚复合物的形成, c-Src, PI3K, MAPK活性的变化及其对TAM处理的反应；建立“过表达” Cbl基因BT474细胞株和“沉默” Cbl基因的T47D细胞株，观察Cbl家族对脂筏聚集，ER-c-Src-HER-2受体复合物形成及细胞增殖及ER膜受体信号通路活性的影响。筛选c-Cbl/Cbl-b相互作用蛋白，明确Cbl家族调控ER膜受体信号通路活性的靶分子。利用动物试验研究“过表达” 和“沉默”Cbl基因对HER-2介导的乳腺癌增殖及其对TAM疗效的影响；确立乳腺癌组织Cbl表达与乳腺癌病人TAM内分泌治疗耐药的关系。我们的研究结果显示：在HER-2过表达的BT474与HER-2阴性的T47D细胞之间存在对于TAM的敏感性差异；在TAM相对耐药的BT474中存在HER-2-c-Src-ER三聚复合物及下游信号活化；抑制脂筏可影响三聚复合物的形成，抑制下游信号活化，部分逆转TAM耐药；而泛素连接酶 c-Cbl参与了HER-2介导的TAM耐药过程；对242例乳腺癌患者进行临床分析发现：ER阳性患者中，c-Cbl高表达能够显著延长患者的DFS；在HER-2阴性患者中，c-Cbl高表达能够显著延长患者的OS。本研究进一步明确了HER-2介导乳腺癌TAM耐药的发生机制，为临床上预测TAM疗效及研制新型内分泌治疗药物提供了实验基础。