人源抗Trop-2抗体对胰腺癌增殖与转移的抑制作用及分子机制

胰腺癌是一种极其凶险的恶性肿瘤，其发病率及死亡率几乎相等，并在世界范围内均呈上升趋势。胰腺癌的诊治是世界级医学难题，作为一种对现有治疗手段无满意疗效的恶性肿瘤，寻找有价值的胰腺癌分子治疗靶标是目前研究的热点。近年来研究发现，Trop-2是一种细胞膜钙离子通道相关蛋白，在胰腺癌患者中的阳性率高达71%,主要表达在胰腺癌细胞的细胞膜上，因此Trop-2可成为胰腺癌治疗的新靶点。针对该靶标，我们从全人源噬菌体抗体库中筛选出抗Trop-2的抗体片段Fab，研究表明该抗体能够诱导胰腺癌细胞BxPc3的凋亡，明显抑制其生长。本研究拟在前期抗Trop-2抗体Fab片段的基础之上，构建全分子IgG抗体的真核表达系统，表达抗Trop-2的IgG抗体，分别在细胞水平和个体水平上，分析该抗体对胰腺癌细胞、移植瘤的生长及转移的抑制作用，探讨抗体诱导胰腺癌细胞凋亡与抑制细胞生长的分子机制。

胰腺癌作为一种对现有治疗手段无满意疗效的高度恶性肿瘤，寻找新的、具有临床应用价值的胰腺癌治疗方法如分子靶向治疗是目前研究的热点。前期研究结果证实，Trop-2在我国胰腺癌患者中的阳性率较高。因此，Trop-2有可能成为胰腺癌分子靶向治疗的新靶点。本研究通过噬菌体抗体库技术和真核细胞表达系统，制备人源抗Trop-2抗体和抗体偶联药物，分析该抗体及抗体偶联药物对胰腺癌增殖与转移的抑制作用。. 1. 利用人源Trop-2蛋白对噬菌体抗体库的筛选，获得特异性的人源抗Trop-2基因工程抗体Fab分子，经ELISA、细胞免疫荧光和FACS检测与分析，证实该抗体能够与胰腺癌细胞BxPc-3表面的Trop-2分子特异性结合； 200ug/ml的抗Trop-2抗体Fab能够显著抑制PL45细胞、BxPc-3细胞的增殖，抑制率在50%以上。. 2. 利用化学合成法，制备了抗Trop-2 抗体Fab片段与阿霉素偶联物（DOX），观察其对胰腺癌细胞生物学特性的影响。免疫荧光检测结果表明，抗Trop-2抗体Fab与DOX偶联物能够与BxPc3细胞特异性结合。DOX - anti-Trop-2 Fab和DOX对胰腺癌细胞BxPc3和PL45都表现出剂量依赖的细胞毒性。10ug/ml的阿霉素在72小时对实验组细胞的抑制率为75%，而含有相同浓度阿霉素的DOX - anti-Trop-2 Fab对细胞的抑制率已近90% . 3. 以本实验室筛选的抗Trop-2抗体Fab基因为模板，构建抗体的真核表达体系，制备全分子抗Trop-2抗体IgG，分析IgG对胰腺癌细胞增殖的影响。经ELISA、IF和FACS等方法检测，证实该抗体能够特异性识别胰腺癌细胞。人源抗Trop-2抗体IgG对BxPC3细胞有明显的抑制作用，作用72小时后抑制率可达61.07%以上；不同比例抗体之间的抑制率比较，具有统计学差异(p<0．05)。当随着抗体浓度的增加，抗体对移植瘤的肿瘤生长抑制作用显著增加，抑制率最高达56.85%。.4. 通过在293T细胞中构建 Tet-on诱导表达系统，体外调控Trop-2蛋白的表达，分析Trop-2的生物学功能。结果证实，体外诱导Trop-2蛋白的表达，能增强293T细胞增殖、迁移与侵袭能力。