退变膝关节内肝经循行对应区域的生物学功能研究

膝骨关节炎是全球多发病，Wnt-β-catenin信号途径及相关因子是引起软骨退变的重要机制。研究证实，软骨退变相关信号与因子在关节内的分布存在区域性调节的特点；中医从"肝主筋"、"肝经循行于膝"、"经脉所至、主治所及"等角度论治骨关节炎，有高循证依据的针灸、手法的共同特点是在经脉(特别是肝经)循行区域治疗，这为定位选取关节的目标区域提供了线索。.课题着眼研究退变膝关节内肝经循行对应区域的生物学功能特点，以期探索此区域内的高敏感信号与因子调节方式及中医药治疗的科学根据。研究将在循经定位目标区域的基础上，以micro-CT与三维有限元分析进行形态计量与模拟力学研究；以激光捕获纤维切割方式获取目标组织并进行Wnt-β-catenin通路、ADAMTs-5等相关因子和靶基因的表达，综合形态计量、模拟力学和功能表达进行分析。申请者的前期自然基金项目也为课题的开展奠定了良好基础。

目的：研究骨关节炎(Osteoarthritis, OA)大鼠膝不同部位特别在肝经循行区域（Liver Meridian Region, LMR）内Wnt-β-catenin信号通路及上下游基因表达特点、病理表现特点及三维力学表现情况并结合在体与体外实验探讨柔肝中药提取物HBP-A防治骨关节炎的作用机理。.方法：以改进前叉韧带切除 (anterior cruciate ligament transection ,ACLT)造模方法建立大鼠膝骨关节炎模型，用Ⅱ型胶原酶消化法提取大鼠透明软骨细胞，用在体实验采集的各组含药血清分2.5%、5%、10%浓度培养；进一步以10ng/ml白介素1β（interleukin-1β，IL-1β）因子诱导软骨细胞分化。.分离膝关节，定位LMR区域，测量软骨和软骨下骨的厚度，Micro-CT扫描及Mimcus三维力学分析，以聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)检测各组动物软骨与软骨下骨及体外软骨细胞内β-catenin、金属基质蛋白酶（Matrix metallopeptidase，MMP-13）、Sox-9（Sex determining Region Y-box 9，Sox-9）基因表达情况，Western-blot检测蛋白表达。.结果： LMR区病理积分与软骨缺损程度增加，但软骨与软骨下骨也出现厚度增加的现象，软骨下骨密度降低，力学性能改变。中药HBP-A干预后，可以改善软骨病理积分，降低软骨缺损程度；添加中药HBP-A和wnt抑制剂，在基因与蛋白层面，均可使Wnt3a、β-catenin、MMP-13表达下降，Sox-9表达升高，并且HBP-A与wnt 抑制剂IWP-2呈现协同作用。研究发表标注论文15篇，其中SCI6篇，获科技奖励2项。.