背部循经推拿对应激模型大鼠亚健康样行为的影响及其神经保护机制研究

推拿可能是通过调整应激状态下HPA轴的功能活动、上调海马神经元脑源性神经营养因子（BDNF）表达水平，进而调节海马神经细胞凋亡相关基因蛋白表达，保护海马神经元，从而改善亚健康临床症状。.该研究拟将60只wistar大鼠分为正常组、模型组和推拿组，后两组予束缚应激，推拿组予背部循经推拿。实验前1d及第7、14、21d采用旷场实验和鼠尾悬挂实验观察大鼠行为学变化，放免法测血清促肾上腺皮质激素、皮质酮，光镜与电镜观察海马组织形态学，原位末端标记法测海马细胞凋亡，免疫组化法、Western blot和RT-PCR测下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素和海马神经元BDNF、bcl-2、bax、caspase-3 及其mRNA表达。项目基于前期临床研究，采用实验方法观察推拿对应激大鼠亚健康样行为和海马神经元的影响及其神经保护机制，从而为培育和开发既具公益性又有着巨大社会需求的中医保健推拿市场提供理论依据。

背景：临床表明，背部循经推拿对亚健康具有理想干预效果，但其作用机制尚未明确。目的：采用实验研究方法观察推拿对应激模型大鼠亚健康样行为和海马神经元的影响，为中医保健推拿提供理论依据。方法：（1）60只wistar大鼠随机分为正常组、模型组和推拿组，后两组予束缚应激，推拿组予背部循经推拿。实验前1d及第7、14、21d利用鼠尾悬挂试验，实验前1d及第21d利用旷场试验，分别观察大鼠的行为学改变。实验结束后放免法测血清ACTH、CORT水平。（2）RT-PCR法测下丘脑CRH mRNA含量，免疫印迹技术测CRH蛋白表达。（3）RT-PCR法测大鼠海马BDNFmRNA表达，免疫印迹技术测BDNF蛋白表达。（4）免疫组化法测海马Bcl-2、Bax及Casepase-3蛋白表达，RT-PCR法测Casepase-3 mRNA表达。(5)组织病理切片观察海马CA3区神经元形态学，TUNEL法观测海马细胞凋亡情况。结果：（1）模型组出现亚健康样症状，而推拿组亚健康样症状介于正常组与模型组之间。（2）模型组下丘脑CRH mRNA及其蛋白表达量较正常组高（P＜0.05）；推拿组下丘脑CRH mRNA及其蛋白表达量较模型组下降（P＜0.05）。（3）模型组海马BDNF mRNA及蛋白表达水平较空白组下降（P＜0.05），推拿组BDNF mRNA及其蛋白表达水平较模型组升高（P＜0.05）。（4）模型组海马Bcl-2蛋白表达下降、Bax与Caspase-3蛋白表达上升，与空白组比较，差异有显著性（P＜0.05）；推拿组Bcl-2蛋白表达上调、Bax蛋白表达下调、Caspase-3蛋白及Caspase-3 mRNA表达均上升，与模型组比较，差异有显著性（P＜0.05）。(5)正常组海马CA3区有大量规则整齐锥体细胞，模型组锥体细胞数量减少，推拿组锥体细胞变化介于两组之间。正常组海马CA3区可见数量较少的TUNEL阳性细胞，模型组及推拿组TUNEL阳性细胞散布整个海马组织。结论：慢性应激亚健康模型大鼠出现HPA轴功能亢进，推拿能下调下丘脑CRH mRNA表达从而下调血清CORT与ACTH含量，拮抗HPA轴功能亢进，改善亚健康身心症状。推拿还能通过抑制Bax与Caspase-3蛋白及Caspase-3 mRNA表达、上调Bcl-2及BDNF蛋白表达水平，从而发挥对亚健康状态大鼠的脑神经保护作用。