内皮细胞高表达脂多糖相关因子1（EOLA1）的转录调控研究

EOLA1基因是我们在活化人血管内皮细胞中克隆的新基因，对其特性的研究显示其通过与金属硫蛋白2A相互作用，作为新的转录因子转导与细胞增殖有关的信号。EOLA1基因定位于Xq27.4，跨越了6266bp的基因组序列，在其5'-侧翼区2kb内存在转录调控序列，但具体的启动子、转录因子结合位点及转录调控机制尚不清楚。本项目拟通过5'-RACE确定EOLA1基因转录起始位点；克隆EOLA1基因5'-侧翼区片段，进行缺失突变观察缺失片段启动荧光素酶报告基因表达变化，确定基本启动子序列；分析基本启动子周围序列，用DNA酶Ⅰ足迹作图检测受转录因子保护的顺式作用元件，经凝胶迁移变化分析、超迁移分析和竞争分析试验确定这些转录因子；定点诱变起主要作用的转录因子Sp1结合位点或改变其表达水平，观察突变Sp1识别序列或改变Sp1/Sp3表达浓度对基本启动子活性的影响；以期阐明EOLA1基因转录调控机制。