人类新基因EOLA1在内皮细胞中的作用研究

EOLA1(内皮细胞高表达脂多糖相关因子1)是我们从受脂多糖激活的人脐静脉内皮细胞中克隆的新基因，它可能在炎症刺激时胞内信号转导中起着作用。本项目拟通过原核表达系统取得EOLA1蛋白抗原，免疫家兔后制备抗EOLA1多克隆抗体；以酵母双杂交钓取与EOLA1相互作用蛋白；构建强制表达EOLA1质粒，转染内皮细胞，筛选出阳性细胞后再用制备的抗EOLA1多抗进行Western杂交验证，建立可诱导的稳定强制表达EOLA1内皮细胞株；另外，采用RNA干扰技术，构建诱导后能在细胞内表达小干扰RNA、特异沉默EOLA1基因的重组质粒，转染内皮细胞，经Western 杂交检验，建立可诱导的稳定下调表达EOLA1内皮细胞株；培养细胞，观察长时间强制或抑制EOLA1表达，对内皮细胞形态、脂多糖刺激后细胞活化状态、细胞生长和周期的影响，从而了解EOLA1基因在内皮细胞炎症反应中的作用，阐明其功能。