中国新型汉坦病毒的分子流行学研究

Despite the fact that comprehensive preventive measures including vaccination have been taken in the past decades, hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) still remains a significant public problem in China. In oder to better understand the molecular epedimology and evolution of hantaviruses and their reserviors of small animals indcluding rodents and insevtiores in China, surveys will be carried out in three kinds of HFRS epidemic regions, which are respevtively representative of three different geography-ecology types. Small animals will be trapped with cage-traps to know their population compositions and capture rates in these HFRS epidemic regions. Lung and kidney tissue samples will be collected from trapped animals. Mitochondrial cytochrome b (Cyt b) gene sequences will be amplificated from the tissues to study the inter-species/intra-species evolutionary relationships between the captured Chinese small animals with those outside China. The indirect immunofluorescence assay and the hantavirus specific RT-PCR will be used to find the hantaviruses carried by the captured animals. Hantavirus genome sequences (the complete S and M segments and partial L segments) will be recovered from the positive samples. Hantaviruses will isolated by cell cutures. Genetic and phylogenetic analyses of hantavirus genome sequences will be reveal whether novel hantavirses are present in the Chinese species of small animals or the viruses found abroad are cicurlating in the similar species of the Chinses animals respecticely. Futhermore, these analyses will show the genetic diversity of hantaviurses in these regisons and their evolutionary ralationship with the known hantaviruses in and outside China. Human sera will be collected from patients with clinical signs of HFRS, suspected patients with fever, thrombocytopenia, and bleeding, or even from humans with the history of the abvoe clinical signs. The infectivity and the pathogenicity of novel hantaviruses to human will be determined by the indirect immunofluorescence assay and the hantaviral specific RT-PCR. The data obtained in this study may shed new light on the prevention and control of the disease they cause.

选择我国三种不同生态类型有代表性的HFRS疫区，开展汉坦病毒（HV）与宿主动物的分子流行病学研究。在三种地理生态类型的HFRS疫区现场捕获小动物（主要是啮齿类与食虫类），明确小动物的种群构成、捕获率。采集小动物的肺与肾组织，扩增线粒体细胞色素b基因，研究这些小动物与国内外已知小动物的种间及种内进化关系。用免疫荧光与RT-PCR法检测组织中HV，明了小动物携带HV的类型，这些病毒在不同生态类型的流行情况。扩增病毒基因组核苷酸序列，通过系统进化分析方法分析，了解HV在我国三种不同地理生态类型疫区的遗传多样性、系统发生关系，以及与国内外相应HV的进化关系，揭示国外已发现的新型HV在我国的同种小动物中是否存在，以及我国特有小动物种是否携带未知的HV；培养细胞分离HV，在当地采集不明原因发热及伴有血小板减少出血等症状的病人与HFRS病人血清及当地有发热史人群的血清，研究新型HV对人的感染性与致病性。

我国是世界上受汉坦病毒危害最为严重的国家。我们在我国不同地理生态环境的地区开展汉坦病毒的分子流行病学研究。在国际上率先发现了4个全新汉坦病毒：从浙江龙泉地区采集的菊头蝠中发现了龙泉病毒（Longquan virus）、从湖北武汉黄陂采集的普通伏翼蝠黄陂病毒（Huangpi virus）、从内蒙古牙克石地区采集的东北鼩鼱中发现了牙克石病毒（Yakeshi virus）、从云南梁河四川短尾鼩中发现了梁河病毒（Lianghe virus）。我们在国内率先发现了2个新汉坦病毒：从黑龙江抚远黑瞎子岛采集的阿尔泰鼩鼱中发现了肯凯姆病毒（Kenkeme virus）、从浙江宁波采集的大麝鼩中发现了临津江病毒（Imjin virus）。.在国际上率先证明了蝙蝠是汉坦病毒的自然宿主，值得注意的是在浙江龙泉地区，不但中菊头蝠能携带龙泉病毒，中华菊头蝠与单角菊头蝠也能携带该病毒，当地蝙蝠龙泉病毒的携带率为5.3%。在国际上首次证明了GOUV能引起人肾综合征出血热，GOUV的致病性介于汉滩病毒与汉城病毒之间。.我们提出了汉坦病毒起源进化的新理论。汉坦病毒可能最早在蝙蝠或食虫目动物出现，然后跳跃到啮齿类动物，形成在啮齿类动物间以及啮齿类动物到人的传播；汉坦病毒可能最早起源于亚洲。汉坦病毒与翼手目、食虫目、啮齿目宿主动物间的系统发生关系不相一致；汉坦病毒在不同目、科、属、种间的宿主动物间出现了跨种间传播，基因重排也很早发生在不同目宿主动物携带的病毒之间，跨种间传播在汉坦病毒物种形成中起决定性作用。现在所知的汉坦病毒可能最早起源于节肢动物，经跨种间传播到翼手目、食虫目、啮齿类动物；在哺乳动物中经进一步的跨种间传播、适应进化（共进化）、宿主的迁徙，以及地理生态等因素形成当今汉坦病毒生物种的多样性及其世界性的地理分布。. 在我国东北地区引起出血热类疾病病原谱的复杂性，由于临床医院缺少相应的实验室诊断试剂，对于这些病例早期诊断的的误诊率为82.4%。我国东北丹东地区流行着恙虫病。. 我们还发现大量新病毒（约1600种），重新界定了无脊椎动物RNA病毒圈。为研究病毒的起源进化提供了依据。