疣毒净通过PKR信号通路延缓宫颈恶性肿瘤形成

The persistent infection of High-risk human papillomavirus is a necessary factor for cervical precancerous lesions and invasive cervical cancer . Without the effective means cleaning HPV ,we couldn't block the progressing of cervical cancer.The previous studies showed the You Du Jing can eliminate the HPV virus effectively and reverse the morphology of cervical cancer with the PKR pathway activated effectively . Accordingly, we speculate activated PKR pathway by You Du Jing could block viral replication and integration to the nucleus and serve to preventing the process of carcinogenesis. This study will collect the cervical tissues of the HR-HPV infection patients accepted the therapy of You Du Jing, use a gene mum and analogue stimulation technology to explore for cervical epithelial immortalized cell model H8 with the impacting of You Du Jing, whether it could delay the formation of cervical cancer by affecting the PKR pathway, thus new medicine therapeutic targets and the specific proteins could apply to the prevention of cervical lesions of Traditional Chinese Medicine.

高危型人乳头瘤病毒（high risk-human papillomavirus，HR-HPV）的持续感染是宫颈癌变的必要因素，清除HPV病毒可有效阻断宫颈癌的进程，但目前缺乏清除HR-HPV的有效手段。我们前期的研究表明疣毒净能清除HPV病毒，对宫颈局部细胞及组织有逆转作用，疣毒净能激活宫颈癌Hela细胞的PKR信号通路，进而我们推测疣毒净可能通过激活了HPV感染的宫颈细胞的PKR信号通路，从而阻断了病毒的复制和向细胞核的整合，起到防止细胞癌变的作用。本研究采集临床HR-HPV感染病人疣毒净治疗前后宫颈组织行免疫组化检测了解疣毒净对人体宫颈细胞PKR传导通路的调节作用，采用基因沉默和激活技术，探讨疣毒净对HPV感染的人宫颈永生化细胞（H8细胞）PKR信号通路的影响及其是否通过PKR通路的影响达到延缓宫颈恶性肿瘤形成的作用，从而为中药防治宫颈癌前病变提供新的治疗靶点和疗效评价的特异性蛋白。

宫颈癌常由一系列的癌前病变发展而来，这些癌前病变的发生与高危型人乳头瘤病毒（high risk-human papillomavirus，HR-HPV）感染密切相关，故清除病毒或阻断病毒发挥作用是防治癌前病变、阻断宫颈癌发生的重要途径。目前临床上预防宫颈癌的方法主要有2种：1.对于未感染病毒的患者，通过注射疫苗避免感染；2.利用宫颈癌的三阶梯防治（主要是病理学随访及宫颈锥切手术）阻断癌前病变进展。然而对已经感染HR-HPV病毒的癌前病变尚缺乏公认有效的治疗措施。我们通过临床研究证实疣毒净可有效清除HR-HPV的持续感染、逆转宫颈病变的病理级别；然而人体组织样本检测及细胞实验均提示疣毒净不通过PKR信号通路发挥作用。为了进一步明确疣毒净延缓宫颈恶性肿瘤形成的作用机制，我们进行了如下一系列研究。1、将疣毒净治疗前后临床标本进行转录组测序分析，发现HR-HPV持续性感染宫颈组织后，可能导致适应性免疫应答由以IL-12、IFN-γ 为代表的Th1 型细胞免疫促进因子向以IL-10、IL-4为代表的Th2型细胞免疫抑制因子发生漂移，从而发生免疫逃避机制；IL-17 信号通路可能为其中关键作用通路。2、通过基础实验证实疣毒净延缓宫颈恶性肿瘤形成的三大机制：①通过促进RIP1与RIP3及MLKL的结合，形成凋亡小体，诱导宫颈癌前细胞出现坏死性凋亡；②通过单体紫草素上调miR-183-5p抑制宫颈上皮细胞EMT途径，从而抑制宫颈癌细胞增殖、迁移及浸润；③通过单体苦参碱上调miRNA-375-3p抑制HR-HPV病毒转录为活性蛋白，从而发挥抑癌作用。综上，说明疣毒净可在病毒感染或癌前病变的早期进行药物干预，发挥清除病毒、逆转癌前病变的作用，从而避免以手术的方式预防宫颈癌的发生，具有重大临床意义；且为开发防治宫颈早期病变新药奠定基础。