组蛋白去乙酰化酶抑制剂（(HDACIs）对大鼠失血性休克模型重要器官保护作用的研究

为探索组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACIs）对失血性休克大鼠模型生存改善及其重要器官组织保护作用的真伪。取导管分时放血法建立大鼠失血性休克模型，HDACIs联合液体、自体输血治疗不同时间点的动物模型组，分时分组收集其心、肝、脑、脾、肺、肾组织，经亚细胞蛋白质组抽提后，采用胶电泳、免疫印迹等法检测组蛋白乙酰化（histone H3K9）、非组蛋白乙酰化（β-catenin）状态及器官细胞凋亡，并进行凋亡抗体芯片的检测；此外，创新地设计自体输血后HDACIS干预的对照研究，为明确输血后是否有必要使用该药物治疗提供理论依据。本题全面地了解HDACIs和失血性休克各重要器官之间的联系，填补该领域的空白。随着车祸、自然灾难等危险因素增加，失血性休克发病率也随之上升，如能找到传统抗休克之外新的治疗途径，本题具有十分重要的现实意义。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACIs）对失血性休克大鼠模型具有保护作用，这种“药物复苏”将可能成为潜在治疗失血性休克的急救方法，特别在现场急救中具有良好应用前景。但至今其作用机制不十分清楚，HDACIs是否与液体和血液复苏存在协同作用，仍然存在质疑。我们获得国家自然基金资助开展以下主要研究内容：建立SD大鼠重度失血性休克模型，采用HDACIs（SAHA、VPA）进行不同组别干预，通过TUNEL和扫描电镜观察大鼠模型重要器官（脑、肺、心、肝、脾、肾及骨髓）的细胞凋亡；采用Weatern blot与RT-PCR检测Bcl-2、BAX和caspass 3的表达结果探索HDACIs抗凋亡的调节机制；进一采用 Affymetrix Rat 230 基因芯片与NMR代谢组学检测结果分析HDACIs抗休克的主要作用机制。通过研究取得以下重要结果：①、本题创新地采用显微技术股动静脉置管分时放血法建立重度失血性休克大鼠模型，该法建模成功率高达79.14%，其克服既往建模失败率高缺点，同时更好地模拟临床急性失血过程。②、重度失血性休克大鼠的重要器官早期凋亡以骨髓细胞凋亡最为明显，我们称之为失血性休克的“骨髓抑制现象”；富含血器官肺、肝、脾、肾细胞凋亡现象明显高于心、脑组织的凋亡。③、HDACIs提高12小时内重度失血性休克大鼠模型的生存率，其中SAHA治疗作用优于VPA，HDACIs能够抑制重要器官的细胞凋亡；更为重要的是：HDACIs联合输液或自体输血显著提高重度失血性休克大鼠模型72h内的生存率，研究表明HDACIs具有与输液或自体输血的协同作用。④、HDACIs的抗休克后细胞凋亡作用是通过双向调控促凋亡（BAX与caspass 3）和逆凋亡（Bcl-2）蛋白实现的。⑤、基因芯片结果显示：HDACIs抗休克作用主要与代谢过程、生物调控、应激等基因上/下调相关，而与细胞凋亡相关基因改变反而不十分重要。NMR代谢组学分析进一步HDACIs抗休克作用主要改变一系列参与营养、生物调控、应激、抗氧化及免疫等的小分子物质代谢，使得机体有利于失血性休克的修复。因此，我们认为HDACIs抗失血性休克作用机制主要通过改变基因表达从而调控代谢过程、生物调控、应激等达到休克修复作用。该研究开展为进一探索HDACIs抗凋亡、抗休克机制提供依据与参考，为防治失血休克探索了“药物复苏”的新途径。