复制缺陷型痘苗病毒辅助的全基因HCV细胞培养系统的构建

前期课题组已建立痘苗病毒辅助的全基因HCV(1b型)细胞培养系统，重组HCV病毒具有与野生型HCV病毒类似的感染性，每毫升培养上清中重组HCV拷贝数达107。然而通过该系统生产的重组HCV颗粒中含有感染性痘病毒vTF7-3的污染，由于痘病毒的复制引起细胞死亡，只能进行瞬时培养(4-5天)，进而严重制约该体系在药物筛选等领域的应用。为解决这一问题，本课题拟构建一个D13L基因缺陷型痘苗病毒，D13L基因是痘苗病毒的必要基因，其表达的限制或阻抑对于病毒转录和DNA复制没有影响，但能够阻碍痘苗病毒颗粒的形成。因此使用D13L基因缺陷型痘苗病毒重组体生产HCV颗粒，可得到几乎没有辅助痘苗病毒污染的HCV颗粒。该体系可为HCV研究者提供大量材料，还可以用于抗HCV药物筛选、疫苗筛选，以及支持HCV感染的细胞系筛选。还可以应用其它难以培养的RNA病毒生产及疫苗的研制。