锌指蛋白ZFP64在TLRs诱发巨噬细胞产生炎性细胞因子的作用及其机制探讨

锌指蛋白在个体的生长发育、细胞增殖、分化和凋亡等生命活动过程中发挥重要作用。TLRs作为一种重要的模式识别受体在免疫应答过程中发挥重要作用。ZFP64，锌指蛋白的一种，是否可调控TLR信号通路影响免疫应答？对于这些方面的认识，未见文献报道。本课题旨在探讨ZFP64对巨噬细胞TLRs介导的MyD88和TRIF途径的调控及其机制，为临床炎症反应的防治提供新措施。我们预实验结果表明：在RAW246.7细胞及腹腔巨噬细胞均表达ZFP64；干扰ZFP64的表达后，LPS促发的TNFa和IL-1β分泌明显增加；过表达ZFP64可显著抑制LPS介导的ERK1/2的磷酸化和NF-KB的转录活性。初步结果提示ZFP64可能负相调控LPS介导的炎性细胞因子的产生。该项目的完成可揭示ZFP64在机体炎症反应中的调控机制，丰富了炎症的内源性调节机制，将临床治疗为炎症提供新的思路。

严格调控TLR触发的天然免疫反应是至关重要的，对于其调控机制需要进一步深入探讨。锌指蛋白（ZFP）作为一种重要的转录因子，在调控细胞功能（如分化、发育、肿瘤形成和免疫系统等）方面发挥重要作用，但ZFP家族成员在天然免疫调控中的作用不清楚。在我们的研究中，发现TLR配体（LPS, CpG ODN或Poly(I:C)刺激可明显上调巨噬细胞中ZFP64的表达。ZFP64的过表达促进巨噬细胞中TLR触发的TNF-α, IL-6 和IFN-的分泌。相应地，干扰ZFP64表达抑制上述细胞因子的分泌。此外，在机制方面我们，我们发现ZFP64可活化MAPK和IRF3，但他们的活化与ZFP64介导的细胞因子调控无关。有趣的是，ZFP64能显著上调TLR诱导的NF-κB的活化。在TLR刺激情况下，ZFP64能结合TNF-α, IL-6 和IFN-的启动子序列。而且，LPS刺激后，ZFP64可结合NF-κB p65亚基，干扰ZFP64表达后，p65对TNF-α, IL-6 and IFN-启动子的结合明显降低。我们的研究提出ZFP64结合p65，增强p65对炎性细胞因子DNA启动区的募集，增强p65的活化，促进炎性细胞因子的产生。总之，我们的研究为TLR触发的抗感染免疫提供新的分子机制。